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小鼠Krüppel样因子4RNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定

来源 :2016中华医学会呼吸病学年会暨第十七次全国呼吸病学学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户：ake5nene

【摘 要】

：

目的 构建小鼠KLF4 RNA干扰慢病毒表达载体,为后期进一步探讨KLF4与间质性肺疾病的作用机制奠定实验基础. 方法 制备KLF4-shRNA DNA片段,与载体连接构建干扰载体pLVX-KLF4-shRNA,转化DH5α,筛选阳性克隆,并测序鉴定.在Lipofectamine(R)3000的介导下,Plvx-KLF4-shRNA与psPAX2、Pmd2.G辅助质粒共转染293T细胞,包装产生慢

【作 者】

：

李鑫 

【机 构】

：

武警后勤学院附属医院呼吸与重症医学科

【出 处】

：

2016中华医学会呼吸病学年会暨第十七次全国呼吸病学学术会议

【发表日期】

：

2016年4期

【关键词】

：

小鼠 Kruppel RNA 构建 

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论文部分内容阅读

　　目的 构建小鼠KLF4 RNA干扰慢病毒表达载体,为后期进一步探讨KLF4与间质性肺疾病的作用机制奠定实验基础. 方法 制备KLF4-shRNA DNA片段,与载体连接构建干扰载体pLVX-KLF4-shRNA,转化DH5α,筛选阳性克隆,并测序鉴定.在Lipofectamine(R)3000的介导下,Plvx-KLF4-shRNA与psPAX2、Pmd2.G辅助质粒共转染293T细胞,包装产生慢病毒Lenti-KLF4,将慢病毒感染RAW264.7细胞,RT-PCR法检测KLF4 Mrna的表达.通过流式细胞仪测定病毒滴度.用分选流式细胞仪分选出KLF4沉默的RAW264.7细胞.

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