肝细胞肝癌胆汁蛋白质组学研究

来源 :中华放射学学术大会2016、中华医学会第23次全国放射学学术大会暨中华医学会第24次全国影像技术学术大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yuxiaohe19861111
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  背景与目的:全球范围内肝癌发病率居男性恶性肿瘤第5位,女性恶性肿瘤第8位,而且55%新发病例在中国.多数患者确诊时已是中晚期,治疗效果不好,预后极差.只有早发现,早诊断,早治疗,才能提高生存率.本研究运用高通量蛋白组学技术,对肝癌胆汁和胆结石病胆汁进行对照性研究,筛选用于早期诊断肝癌的特异性肿瘤标记物.方法:收集肝癌(HCC)和胆结石病胆汁及血清样本.通过高速离心去除细胞碎片、胆固醇、黏液;使用cleanasciteTM试剂盒除去脂质;3kDa超滤管浓缩胆汁并滤去多余的盐分.运用双向电泳技术分离肝癌和胆结石病胆汁混合蛋白.双向电泳凝胶采用考马斯亮蓝(G-350)溶液或硝酸银染色.应用PDQuest8.02D凝胶图像分析软件分析图像,寻找差异表达蛋白质点.选择差异表达超过2倍的蛋白点进行MALDITOF质谱鉴定,获取蛋白指纹图谱(PMF),通过数据库生物信息学的检索及分析,鉴定出有意义的差异表达蛋白质.使用蛋白印迹(Westernblot)和酶联免疫吸附测定(ELISA)检测方法验证硫氧还原蛋白过氧化物酶2(Peroxiredoxin2,PRDX2)在HCC和胆结石病的胆汁及血清中的表达情况.结果:成功建立肝癌和胆结石病胆汁的双向电泳凝胶图,对考马斯亮蓝(R-350)染色的凝胶分析显示两者存在66个差异蛋白点.对其中32个差异表达超过2倍的蛋白点进行质谱鉴定,结果发现14种差异表达蛋白.通过对蛋白功能查询后,发现PRDX2蛋白表达的量与肿瘤发病存在一定的相关性.Westernblot和ELISA分别检测PRDX2在肝癌和胆结石病胆汁及血清中的表达量,结果显示PRDX2在HCC胆汁及血清中的表达量均较胆结石病高.结论:本研究运用蛋白组学技术很好地显示了肝癌胆汁与胆结石病胆汁间的差异表达蛋白,并鉴定出PRDX2蛋白可能成为早期诊断肝癌的新肿瘤标记物.
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