【摘 要】
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目的：构建结核分枝杆菌Rv1419 DNA疫苗(pVAX1-Rv1419重组质粒),并评价其免疫原性.方法：以基因H37Rv基因组为模板,PCR扩增rv1419基因,插入pGEM-T载体中,经酶切鉴定与序列测定证实后,再与真核表达载体pVAX1连接,构建真核表达质粒pVAX1-Rv1419.50只BALB/c小鼠随机分为5组,分别为生理盐水(A组)、pVAX1载体(B组)、微卡菌苗(C组)、Ag8
【机 构】
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解放军总参谋部总医院(309医院)病理科,北京100091 全军结核病重点实验室
【出 处】
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第九届全国生物医学体视学学术会议、第十二届全军军事病理学学术会议暨第八届全军定量病理学学术会议
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目的：构建结核分枝杆菌Rv1419 DNA疫苗(pVAX1-Rv1419重组质粒),并评价其免疫原性.
方法：以基因H37Rv基因组为模板,PCR扩增rv1419基因,插入pGEM-T载体中,经酶切鉴定与序列测定证实后,再与真核表达载体pVAX1连接,构建真核表达质粒pVAX1-Rv1419.50只BALB/c小鼠随机分为5组,分别为生理盐水(A组)、pVAX1载体(B组)、微卡菌苗(C组)、Ag85A DNA疫苗(D组)和Rv1419 DNA疫苗(E组),每2周肌肉注射1次,共3次,以研究Rv1419 DNA疫苗的免疫原性.第3次免疫后3周杀死小鼠,通过ELISA方法检测小鼠血清中抗Rv1419的IgG抗体;用ELISA法检测小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ和IL-4的表达水平;应用流式细胞术检测全血单个核细胞内分泌IFN-γ的Th1和IL-4的Th2细胞百分比以及Th1/Th2比值.
结果：PCR扩增获得长401bp的rv1419基因片段;重组真核表达质粒pVAX1-Rv1419经双酶切及DNA测序证明构建成功.E组小鼠特异性抗体IgG高于A组和B组(p＜0.05),与C组无显著性差异.E组IFN-γ水平高于A、B、C组(p＜0.05),低于D组.E组Th1细胞百分比和Th1/Th2细胞比值显著高于A和B组(p＜0.01),但与C、D组无统计学差异.
结论：成功构建了结核分枝杆菌DNA疫苗,即pVAX1-Rv1419重组质粒,并且证明此疫苗有较强的免疫原性,主要刺激Th1型细胞介导的免疫应答.
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