【摘 要】
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根据Genbank发表的鸭IL-2基因序列设计并合成了特异性引物，以经ConA诱导的广州鸭外周血淋巴细胞提取的总RNA为模板，用RT-PCR方法扩增出长度为360bp的目的基因片段。将该基因克隆到pMD18-T simple vector上，经酶切、PCR鉴定及序列测定结果表明获得了鸭IL-2成熟蛋白基因的完整克隆。测序结果表明，该成熟蛋白基因由360个核苷酸组成，共编码119个氨基酸。在核苷酸水
【机 构】
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华南农业大学兽医学院,广东 广州 510642 福建农林大学动物科学学院,福建 福州 350002
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会教学专业委员会第六届第12次学术研讨会
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根据Genbank发表的鸭IL-2基因序列设计并合成了特异性引物，以经ConA诱导的广州鸭外周血淋巴细胞提取的总RNA为模板，用RT-PCR方法扩增出长度为360bp的目的基因片段。将该基因克隆到pMD18-T simple vector上，经酶切、PCR鉴定及序列测定结果表明获得了鸭IL-2成熟蛋白基因的完整克隆。测序结果表明，该成熟蛋白基因由360个核苷酸组成，共编码119个氨基酸。在核苷酸水平上，与GenBank上序列号为AY173028及AF294322的同源性高达99.4％，氨基酸的同源性达99.2％。将目的基因克隆至真核表达载体pPICZαC载体，构建重组质粒pPICZαC-DuIL-2。酵母转化子经甲醇诱导发酵分泌表达了rDuIL-2，SDS-PAGE测定，证实DuIL-2基因在Pichia pastoris中表达成功，表达的rDuIL-2分子量约为14.3kDa。白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)是T细胞和自然杀伤细胞产生的糖蛋白，能诱导T淋巴细胞增殖，增强CTL细胞毒活性，刺激细胞分泌IFN-γ等细胞因子，促进机体的细胞免疫反应；同时也能激活B淋巴细胞，参与机体的体液免疫应答。1983年Taniguchi等首次将人的IL-2克隆成功。但禽类的研究仍处在初级阶段，1997年Sundick等[4]首次从ConA活化的T细胞中获得了鸡IL-2cDNA，近年来，已在原核和真核表达系统中成功表达，而对水禽的IL-2研究起步较晚，Zhou等在国内首次克隆了鸭IL-2的基因，并在E.coli体系中得到表达，而相关酵母表达鸭IL-2，国内外至今未见报道。为了研究和开发重组鸭IL-2（DuIL-2)作为新型免疫调节和生物治疗的制剂,我们在克隆分析广州鸭IL-2基因的基础上,构建了Pichia pastoris酵母表达DuIL-2系统,并且对表达产物进行了SDS-PAGE分析。
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影响外源基因在毕赤酵母中表达的因素很多，除了载体和受体菌株的选择、重组菌株的表型、mRNA 5＇-UTR的核苷酸序列、终止子、外源基因的拷贝数、整合位点、密码子使用频率、信号肽以外，还包括培养条件如：培养基成分、诱导时间、培养基pH值、甲醇浓度、接种量和通气量等。为使影响因素降至最低，提高表达产量，本文主要探索影响诱导表达的几个因素，如诱导时间、甲醇浓度及培养基pH值等，以提高ChMIL-18、H
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为研究来自全国各个地区的猪2型链球菌耐药性及耐药基因的流行情况，对实验室分离的122株2型链球菌采用K-B（Kir by Bauer）纸片法检测2004~2006年从湖南、湖北、河南、浙江、广西、河北、北京、广东、江西、安徽等十三省分离的122株2型链球菌对14种抗生素的耐药性。实验结果显示：所分离的122株猪源链球菌对万古霉素、环丙沙星和先锋霉素V表现较高的敏感性，耐药率均低于10℅，尤其对万古
羊痘(Capripox)是由羊痘病毒(Capripoxvirus CaPV)引起的羊一种急性、热性、接触性传染病。其特征是发热、无毛或少毛部位皮肤黏膜发生丘疹和疱疹。羊痘是所有动物痘病中最为严重的一种，经常引起羔羊的死亡，致死率可达100％，成年易感绵羊的死亡率也在50％左右。因此被世界动物卫生组织(OIE)列为A类重大传染病，我国将其列为一类动物疫病。该病不仅给养羊业带来巨大的经济损失，还严重影
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利用相对定量RT-PCR方法，以tuf基因为内标，检测8，24，36，48，72h的粪肠球菌浮游状态及其对应的生物膜状态细菌esp表达的时序性。结果表明，esp基因在浮游状态和生物膜状态均表达，但生物膜细菌esp基因整体表达量高于浮游细菌。浮游状态时esp的表达量不随培养时间的变化而出现差异；而生物膜中esp的表达存在一定的时序性，36h生物膜细菌esp mRNA出现高丰度，48 h以后略有降低，
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