【摘 要】
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目的 探讨GRP78在卵巢癌细胞自噬与细胞凋亡中的作用及其作用机制,明确其对卵巢癌细胞生长及顺铂敏感性的影响.方法 以GRP78调节因子BAPTA-AM、A23187分别下调、上调卵巢癌SKOV3细胞中GRP78表达,分别以RT-PCR、Western杂交法检测肿瘤细胞中Beclin-1、Bcl-2、CHOP mRNA及其蛋白表达水平；以GFP-LC3-Ⅱ荧光染色观察肿瘤细胞自噬；以Annexin
【机 构】
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天津市第一中心医院,天津300192
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目的 探讨GRP78在卵巢癌细胞自噬与细胞凋亡中的作用及其作用机制,明确其对卵巢癌细胞生长及顺铂敏感性的影响.方法 以GRP78调节因子BAPTA-AM、A23187分别下调、上调卵巢癌SKOV3细胞中GRP78表达,分别以RT-PCR、Western杂交法检测肿瘤细胞中Beclin-1、Bcl-2、CHOP mRNA及其蛋白表达水平；以GFP-LC3-Ⅱ荧光染色观察肿瘤细胞自噬；以Annexin V-FITC法检测肿瘤细胞凋亡；以MTT法检测肿瘤细胞生长及顺铂敏感性改变.结果 1.下调GRP78表达后,SKOV3细胞Beclin1、CHOP mRNA及其蛋白表达量分别为(0.8605±0.05478)、(0.9521±0.02238)及(0.8108±0.00380)、(0.6813±0.09462),较对照组增高,差异有统计学意义(P＜0.05；P＜0.05；P＜0.05；P＜0.05)；而上调GRP78表达后,Beclin1、CHOP mRNA及其蛋白表达量分别为(0.6537±0.06500)、(0.6375±0.02489)及(0.6195±0.06148)、(0.4313±0.09534),较对照组下降,差异有统计学意义(P＜0.05；P＜0.05；P＜0.05；P＜0.05).2.下调GRP78表达后,SKOV3细胞中Bcl-2 mRNA及其蛋白表达量分别为(0.7136±0.03230)、(0.3854± 0.03231),较对照组下降,差异有统计学意义(P＜0.05；P＜0.05)；上调GRP78表达后,Bcl-2 mRNA及其蛋白表达量分别为(0.9075±0.04730)、(0.5956±0.02902),较对照组增高,差异有统计学意义(P＜0.05；P＜0.05).3.分别下调、上调SKOV3细胞GRP78表达后,SKOV3细胞自噬体荧光值分别为(706.25±117.258)、(473.17±127.903),与对照组(594.58±126.232)相比,差异有统计学意义(P＜0.05；P＜0.05).4.下调GRP78表达后,SKOV3细胞凋亡率为27.42％,较对照组增加,而上调GRP78表达后,SKOV3细胞凋亡率为12.21％,较对照组降低.5.SKOV3细胞顺铂IC50为(3.02±0.624)μg/ml.下调GRP78表达后,SKOV3细胞顺铂IC50为(2.00±0.172)μg/ml,对顺铂敏感性增加了33.78％,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).上调GRP78后,SKOV3细胞顺铂IC50为(4.91±2.515)μg/ml,对顺铂敏感性降低了62.58％,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 GRP78通过调节Beclin1、Bcl-2、CHOP表达而影响卵巢癌SKOV3细胞自噬与细胞凋亡水平,进而影响卵巢癌顺铂敏感性,因此GRP78可能成为卵巢癌治疗及提高卵巢癌顺铂敏感性的新靶点.
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