西里伯斯青鳉的生殖细胞标记基因dnd的克隆与表达分析

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Dead end(dnd)基因已经被证实编码一种对于脊椎动物原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)发育和配子发生至关重要的RNA结合蛋白。本实验报道了西里伯斯青鳉(Oryziascelebensis)dnd(Celednd)基因的克隆以及表达模式。克隆了西里伯斯青鳉dnd(Celednd)基因,Celednd c DNA长1417 bp核酸,编码374个氨基酸。选择了五种具有代表性的鱼类和西里伯斯青鳉的Dnd蛋白序列进行系统的比较,与其他鱼类一样含有保守的RNA识别域(RNA recognition motif),及五个保守区(NR、CR1、CR2、CR3和CR4)。RT-PCR显示Celednd RNA具有组织表达特异性,它在两性中都有表达而且仅限于生殖细胞。原位杂交结果显示,在精巢中,Celednd在精原细胞以及减数分裂的细胞中表达量较高,在精子中不表达;在卵巢中,Celednd在整个卵子发生过程中都有表达。此外,显微注射融合了绿色荧光蛋白的Celednd 3’UTR的mR NA,成功标记了西里伯斯青鳉的PGCs。因此,Celednd在配子发生过程中作为保守的生殖细胞标记基因,对于了解PGCs的分化和迁移具有重要作用。
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