论文部分内容阅读
数字PCR作为一种可以绝对定量的检测目标DNA分子数的核酸扩增技术，与荧光定量PCR相比，具有准确性好，灵敏度高等优点，近几年已经被广泛应用到了分子生物学的研究当中.数字PCR技术从1 999年被Bert Vogelstein和Kenneth W.Kinzler提出之后，发展迅速，迄今为止已经有液滴数字PCR、凝胶数字PCR、微流控芯片数字PCR等多种方法.在诸多种类的数字PCR技术当中，基于微流控芯片的数字PCR技术更加方便也更加适合推广应用.本文设计了一种自吸分液式进样的数字PCR芯片，芯片使用PDMS制作，预先抽真空处理，使用时即可依靠自身腔体内的负压，将反应试剂吸入芯片中.因为进样过程无需外接设备，因此更适合在环境较为简陋的地区进行现场即时检测，实现Point of CareTesting.每张芯片上包含三个反应区域，可以同时进行三个样品的检测.三个区域用水槽分隔，在反应时，四周的水槽可以减少蒸发对反应结果的影响.反应时，每份样品被分散到1040个体积约为2 nL的反应小室中，根据泊松分布，统计反应后绿色荧光增强的反应小室个数，即可推算出样品中目标DNA分子的个数.为验证芯片的可行性，本文将已知浓度的beta-acti n样品梯度稀释，并在芯片上进行数字PCR反应，得到的结果与理论相符，并且得到了10个DNA分子的检测灵敏度.证实了这一芯片的可行性.