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研究背景:前列腺癌是严重威胁男性健康的泌尿系肿瘤。前列腺特异性膜抗原(prostate specific membrane antigen,PSMA)特异性高表达于前列腺癌细胞,是理想的治疗靶点。抗体偶联药物(antibody-drug conjugates,ADC)由抗体、细胞毒性药物及"连接物"(Linker)构成,可实现细胞毒性药物对肿瘤细胞的特异性杀伤,是非常有前景的抗肿瘤药物。研究目的:构建抗人PSMA全抗体的真核表达载体,在CHO-S细胞中表达纯化后,检测其生物学活性,将该抗体与细胞毒性药物DM1偶联制备出抗体偶联药物,并验证其对PSMA阳性细胞的特异性杀伤活性。方法:根据从抗体库中筛选获得的抗人PSMA单链抗体的基因序列,人工合成重链可变区和轻链可变区基因,依次克隆入真核表达载体。瞬时转染CHO-S细胞后收集培养上清,亲和层析纯化获得抗人PSMA的全抗体,命名为PSMAb,利用间接ELISA、流式细胞术及间接免疫荧光染色检测其生物学活性。将PSMAb与微管抑制剂DM1偶联制备出抗体偶联药物(PSMAb-DM1),并在体外验证其特异性杀伤活性。利用PSMA阳性及PSMA阴性前列腺癌荷瘤裸鼠模型,检测PSMAb在体内的特异性定位,及PSMAb-DM1对PSMA阳性前列腺肿瘤生长的抑制作用。结果:成功表达并纯化获得了抗人PSMA全抗体PSMAb,SDS-PAGE和Western blot证实其具有较高的纯度;间接ELISA、流式细胞术和间接免疫荧光染色证实PSMAb亲和力高、能特异性结合并有效内化入PSMA阳性细胞;将其与DM1偶联后,间接ELISA及流式细胞术证实药物偶联没有破坏抗体的结合能力,Alamar Blue染色及凋亡检测证实PSMAb-DM1可特异性杀伤PSMA阳性细胞。体内实验证实PSMAb可特异性定位于PSMA阳性肿瘤组织,且PSMAb-DM1治疗后PSMA阳性肿瘤的体积明显缩小,而PSMA阴性肿瘤体积未见缩小,提示PSMA-DM1可在体内有效抑制PSMA阳性肿瘤的生长。结论:成功获得了抗人PSMA全抗体PSMAb,该抗体亲和力高、特异性好、有较好的内化活性,且在体内可特异性定位于PSMA阳性肿瘤组织。所制备的PSMAb-DM1可在体外特异性杀伤PSMA阳性细胞,在体内有效抑制PSMA阳性肿瘤的生长。这些结果为该抗体的进一步应用奠定了基础。