【摘 要】
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近年来,胰岛素样生长因子-1(IGF-1)成为研究者们关注的一个重要基因和研究热点,IGF-1能促进细胞对葡萄糖和氨基酸摄取与利用,增加糖原、脂肪和蛋白等的合成,刺激细胞遗传物质的复制、细胞增殖分化、性腺分泌,促进产后动物泌乳以及新生动物肠道发育等功能.目前,本课题已成功克隆了藏猪IGF-1基因及序列分析,但国内尚未见关于藏猪成熟肽IGF-1表达及活性研究报道.Ma等研究表明,猪血浆中的IGF-1
【机 构】
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四川农业大学动物医学院动物微生态研究中心,成都,611130 成都农业科技职业学院,成都,6111
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第五届第十二次全国学术研讨会
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近年来,胰岛素样生长因子-1(IGF-1)成为研究者们关注的一个重要基因和研究热点,IGF-1能促进细胞对葡萄糖和氨基酸摄取与利用,增加糖原、脂肪和蛋白等的合成,刺激细胞遗传物质的复制、细胞增殖分化、性腺分泌,促进产后动物泌乳以及新生动物肠道发育等功能.目前,本课题已成功克隆了藏猪IGF-1基因及序列分析,但国内尚未见关于藏猪成熟肽IGF-1表达及活性研究报道.Ma等研究表明,猪血浆中的IGF-1水平与猪的体重及增重成正相关,在猪的生长和生殖调控中具有具有重要的生理作用,但血液中IGF-1的含量很低,提取纯化根本无法满足基础研究及治疗需要,且人工合成成本高,采用基因工程在体外大量获得具有生物活性的IGF-1成熟蛋白将是实现IGF-1作用的根本.笔者曾采用大肠杆菌表达系统对IGF-1基因进行原核表达,但原核表达系统缺少蛋白质翻译后修饰和加工,很难表达出具有天然活性的成熟肽,如果把它制成新型的动物生长制剂,后期处理程序较复杂,生产成本高,使得IGF-1在临床的应用将受到限制.毕赤酵母表达系统被认为是一种较为理想的外源蛋白表达系统,该系统遗传稳定,适于高密度培养、重组表达产物杂蛋白少,表达出来的成熟肽具有天然活性.因此本试验利用PCR技术扩增出藏猪IGF-1成熟肽基因,克隆到分泌表达载体pPIC9K并转化至毕赤酵母GS115中,进行真核表达,为进一步研究其生物学功能及其开发IGF-1蛋白作为一种新型的动物生长制剂提供科学依据.本试验在反向引物后端直接合成上His尾巴和c-myc标签，克隆出IGF-1成熟肽基因，克隆到pPIC9k上，转化GS115中，甲醇诱导，获得了具有促进细胞增殖生物活性的体外重组IGF-1成熟肽蛋白。本试验是未经优化的基因，仅仅通过pPIC9K表达载体上一段信号肽序列a因子信号序列来介导IGF-1成熟肽的分泌表达，添加以便后期纯化的His标签和便于检测重组蛋白在靶细胞中表达的c-myc标签，简单的优化发酵条件是远远不够的，今后研究中还可以采用优化密码子、应用AOX1和UAP启动子组合共表达重组蛋白等方法来提高蛋白质的表达量，为藏猪IGF-1成熟肽应用于畜牧业并且规模化生产进行进一步摸索。
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