重组NGF理化分析与生物学活性测定

来源 :第18次全国干扰素及细胞因子学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:beilei
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  目的 对重组NGF进行理化分析和生物学活性测定,为重组NGF的质量标准建立奠定基础.方法 采用Western Blot进行鉴别;SDS-PAGE电泳和HPLC法测定纯;SDS-PAGE还原电泳和MS测定分子量;全柱成像毛细管电泳法测定等电点;Edman降解法测定N-末端氨基酸序列;ELISA法测定蛋白含量;TF-1细胞/MTS活性测定生物学活性.结果 重组NGF经Western Blot鉴别为阳性;非还原SDS-PAGE纯度为95.3%,HPLC纯度为98.6%;还原SDS-PAGE测定分子量为13.7kD;质谱测定分子量为13465.00Da,与理论分子量13465.23Da相差0.23Da,相对误差0.002%;等电点为9.11;N-末端氨基酸测序为SSTHPVFHMGEFSV C,与理论序列一致;经NIBSC重组人NGF(93/556)标准品进行校正,其比活性为1.7× 106 U/mg.结论 初步建立了重组NGF理化分析和生物学活性测定方法,测定结果与理论预期一致,为重组NGF的质量标准建立打下了一定基础.
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