【摘 要】
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目的：初步探讨NELL2调控GnRH神经元进而参与性发育启动的可能机制。方法：针对大鼠NELL2基因，构建NELL2真核表达载体和4对microRNA干扰质粒，分别共转染HEK293细胞，实时荧光定量PCR检测NELL2 mRNA的表达情况，筛选出其中1对干扰效率最高的microRNA，通过重组方法构建慢病毒干扰载体并包装成慢病毒。对幼年期SD雌鼠侧脑室分别注射生理盐水，对照病毒载体和干扰病毒载体
【机 构】
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上海市儿童医院，上海交通大学附属儿童医院 200040
【出 处】
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中华医学会第十六次全国儿科学术大会
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目的：初步探讨NELL2调控GnRH神经元进而参与性发育启动的可能机制。方法：针对大鼠NELL2基因，构建NELL2真核表达载体和4对microRNA干扰质粒，分别共转染HEK293细胞，实时荧光定量PCR检测NELL2 mRNA的表达情况，筛选出其中1对干扰效率最高的microRNA，通过重组方法构建慢病毒干扰载体并包装成慢病毒。对幼年期SD雌鼠侧脑室分别注射生理盐水，对照病毒载体和干扰病毒载体，注射后分别于30日龄、35日龄及45日龄时各组大鼠处死10只，观察并记录大鼠阴门开启时间。结果：与对照组相比，30日龄、35日龄及45日龄NELL2-microRNA病毒组NELL2基因和蛋白表达水平均明显下降。说明本研究构建的慢病毒干扰载体在体内能够持续、高效的抑制NELL2基因的表达。实验过程中观察各组雌鼠阴门开启时间分别为：NS(33.8±1.47)；V-neg(34.1±1.19)；V-miR(36.9±1.37)。干扰病毒组阴门开启时间与对照组相比明显延迟，说明NELL2可以影响大鼠性发育启动。结论：NELL2可以影响GnRH的基因表达。NELL2-microRNA慢病毒干扰载体在大鼠体内能够有效抑制NELL2表达，进一步抑制GnRH基因表达，达到延迟大鼠性发育的作用。
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