【摘 要】
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由灰葡萄孢病菌引起的灰霉病是最重要的世界性病害之一,因为缺乏抗灰霉病的种质资源,化学防治仍然是防治灰霉病的主要措施之一.但由于灰葡萄孢繁殖系数大、自发突变几率
【机 构】
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河北农业大学植物分子病理学实验室,保定071001
【出 处】
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中国植物病理学会2010年学术年会
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由灰葡萄孢病菌引起的灰霉病是最重要的世界性病害之一,因为缺乏抗灰霉病的种质资源,化学防治仍然是防治灰霉病的主要措施之一.但由于灰葡萄孢繁殖系数大、自发突变几率高给防治带来了很大困难.研究表明,在条件适宜时,病原真菌能够产生大量分生孢子,这些孢子经气流传播至寄主植物,病菌侵入寄主以后又在病斑上产生大量的新生分生孢子,引起再侵染.孢子对于病害的流行和侵染循环起着关键作用,能否产生大量的孢子,且孢子在侵染循环中能否发挥正常功能,都决定着病害流行.因此,抑制病菌的孢子形成是防治真菌病害的有效途径之一.目前,有关丝状真菌孢子形成的研究相对较少,主要集中在构巢曲霉、稻瘟病菌、寄生隐球丛赤壳、木霉等真菌上.所以从分子水平上研究灰葡萄孢病菌的产孢调控机制对于有效控制灰霉病具有重要的意义.本实验室利用ATMT技术获得了400多株突变体,从中筛选到产孢量与野生型有显著差异的突变体菌株BCG-183.对该突变体的表型进行分析,研究发现其菌丝较野生型多,且菌落中央呈白色,菌落周围呈灰色.从培养一周的菌落上用无菌水洗下分生孢子,利用血球计数板显微观察计算分生孢子数.结果表明突变体产孢量较野生型显著减少.对菌丝生长速率进行测定发现BCG-183较野生型生长减缓.利用CTAB法提取BCG-183的基因组DNA,通过TAIL-PCR技术扩增灰葡萄孢ATMT突变体BCG-183菌株的T-DNA插入位点侧翼序列.其中T-DNA左右边界的嵌套引物、随机引物的合成参照Mullins等的方法.TAIL-PCR第三轮PCR产物回收测序.测序结果表明T-DNA插入到了灰葡萄孢基因组超级重叠群42(Supercontig42)中假定蛋白编码基因(BC1G-07455.1)下游1354 bp处.
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