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目的探讨let-7c-5p转录后调控和通过Wnt/β-catenin通路转录水平调控CyclinDl促进成骨细胞增殖活化。方法依据地方性氟中毒病区划分标准,选择贵州省燃煤污染型氟中毒病区织金县荷花村为调查点,非氟中毒地区安顺市双堡镇张官村作为对照点,知情同意原则下取调查对象血、发、尿样,氟离子选择电极法测定调查人群体内氟负荷,微量酶标法和ELISA检测ALP活力和BGP含量。在课题组前期miRNA-seq分析基础上,使用miRWalk3.0数据库预测靶向CyclinDl的miRNA,筛出与氟暴露相关、靶向调控CyclinD1且表达明显下调的miRNA——let-7c-5p,进一步生物信息学分析显示,let-7c-5p还靶向WNT/β-catenin通路中的Wnt9a。qRT-PCR在248例调查对象中验证let-7c-5p表达、CyclinD1和Wnt9amRNA转录,ELISA检测CyclinD1及Wnt9a蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验分别验证let-7c-5p与CyclinDl和Wnt9a的靶标关系。以0,600,1200μmol/L氟化钠(NaF)处理人成骨细胞72h构建氟中毒细胞模型,及过表达人成骨细胞中let-7c-5p后予0,1200μmol/L氟化钠处理。CCK-8、EdU染色、流式细胞术检测氟对成骨细胞增殖和周期的影响;微量酶标法和ELISA检测ALP活力和BGP含量;qRT-PCR检测let-7c-5p、CyclinD1及Wnt9a表达;Western-blotting检测CyclinD1、Wnt9a及核内外β-catenin蛋白表达;细胞免疫荧光检测β-catenin核转位;染色质免疫共沉淀(ChIP)检测β-catenin在CyclinD1转录调控区结合。结果人群和体外实验结果均显示,随着氟暴露剂量增加,ALP活性和BGP含量升高,let-7c-5p表达降低,CyclinD1、Wnt9amRNA转录及蛋白表达增加。共转染let-7c-5p和CyclinD1、Wnt9a3’UTR-WT的质粒荧光强度下降。人成骨细胞中,随染氟剂量增加,人成骨细胞增殖活跃,细胞周期进程加快,β-catenin入核增加,β-catenin在CyclinD1转录调控区结合增加。过表达let-7c-5p后可逆转上述现象。以上结果差异均有统计学意义。结论氟暴露可诱导let-7c-5p低表达,低表达的let-7c-5p直接靶向CyclinD1及通过Wnt/β-catenin信号通路在转录水平调控CyclinD1致其高表达,促进人成骨细胞增殖活化。