论文部分内容阅读
目的：猪苓(Polyporus)是药用真菌,归肾、膀胱经,具有增强免疫、抗肿瘤功能等作用,临床应用于浅表性膀胱癌或术后的治疗取得了较好疗效.猪苓的主要化学成分是多糖和甾体类等.前期研究发现猪苓多糖((Polyporus polysaccharides,PPS)不仅能通过Toll-NFkB途径诱导天然免疫抗膀胱癌作用,还能抑制膀胱癌的增殖和上调其凋亡作用,但其分子机制不清.本实验研究猪苓对巨噬细胞极化的调节作用和猪苓多糖通过调节HuR(RNA结合蛋白)介导膀胱癌T24细胞BCL-2mRNA转录后的增殖抑制和凋亡的机制.为中药猪苓功效研究提供分子机制基础和理论依据.方法：主要采用细胞培养、免疫沉淀、基因沉默技术、RT-PCR、Western blotting以及流式细胞术如Hoechst 33342染色和Annexin V-FITC /PI双染检测等方法进行研究.结果：IFN-γ可单独诱导M1巨噬细胞模型,猪苓多糖作用于M1型巨噬细胞,分泌的因子增加,但是对膜蛋白影响不大；猪苓多糖单独作用于巨噬细胞,可以增加膜白蛋的表达量和细胞因子的分泌.猪苓多糖可极化巨噬细胞为M1型,也可以增加由IFNγ诱导的M1炎症因子的表达,同时也增加抑炎因子的表达,有着双向的调节作用.HuR过表达可提高膀胱癌T24细胞BCL-2 mRNA的稳定性,增加BCL-2mRNA和蛋白的表达.相反HuR沉默后,BCL-2 mRNA衰减速度明显加快,BCL-2mRNA和蛋白的表达量明显降低.PPS能通过HuR介导的转录后调节途径调控T24细胞BCL-2基因的表达.PPS能减少T24细胞HuR由胞核向胞浆的移位,PPS可降低T24细胞内BCL-2mRNA与HuR的结合量,诱导细胞凋亡.结论：猪苓多糖就可以极化巨噬细胞为M1型,可以增加由IFN-γ诱导的M1炎症因子的表达,同时也增加抑炎因子的表达,有着双向的调节作用.同时猪苓多糖可促进膀胱癌T24细胞凋亡,其通过HuR介导的转录后调节途径降低T24细胞BCL-2基因的表达达到干预膀胱癌的作用.