论文部分内容阅读
目的 探讨冠心病患者外周血CD14+单核细胞基因组DNA总体甲基化水平为阐明冠心病患者外周血CD14+单核细胞的异常活化提供理论依据.方法 密度梯度离心法和磁珠分选法分离20例冠心病患者和11例冠脉造影阴性对照的外周血CD14+单核细胞,抽提基因组DNA和总RNA总蛋白,采用基因组总体甲基化定量试剂盒检测冠心病组和对照组DNA总体甲基化水平；采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测甲基化相关基因包括DNA甲基转移酶(DNA methyltransferases,DNMTs)和甲基结合蛋白2(methyl binding protein 2,MBD2)mRNA表达水平；ELISA法检测血浆中炎症因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、IL-6及单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)的水平.结果 与对照组相比,冠心病组(1)血浆炎症因子TNF-α、IL-6及MCP-1表达显著上调(P值分别为P=0.0274,P=0.0295,P=0.0026)；(2)CD14+单核细胞DNA总体甲基化水平明显升高(P=0.0168)；(3)DNMT1mRNA水平明显降低,而DNMT3A和DNMT3B 的mRNA水平明显升高(P值分别为P=0.0185,P=0.0253和P=0.0089),MBD2 mRNA水平明显降低(P=0.0373)(4)相关性分析表明,DNMT1和DNMT3B的mRNA表达水平与DNA总体甲基化水平呈明显正相关,MBD2的mRNA表达水平与DNA总体甲基化水平呈显著负相关,而表达升高的DNMT3A与总体甲基化水平没有明显相关性.结论 (1)冠心病患者血浆TNF-α、IL-6及MCP-1表达显著上调,提示单核细胞的活化状态；(2)冠心病患者外周血CD14+单核细胞基因组DNA呈总体高甲基化,可能是DNA甲基转移酶(DNMT1、DNMT3A和DNMT3B)和甲基结合蛋白MBD2共同作用的结果.