【摘 要】
：
本文为了构建牛皮蝇的皮蝇A(hyderminA,HA)基因的分泌型真核表达载体pEF1 α-HA-AcGFP,并在Cos7细胞中表达与鉴定,试验从牛皮蝇中提取RNA,反转录成cDNA,扩增出HA基因,并在HA序列的上游加一段信号肽序列.通过双酶切将带有信号肽的HA基因序列克隆到真核表达载体pEF1 α-IRES-AcGFP,得到重组真核表达载体pEF1 α-HA-AcGFP.利用脂质体法转染Cos
【机 构】
：
徐州医学院实验动物中心,江苏徐州221004 徐州医学院神经生物学研究中心,江苏徐州221004
【出 处】
：
华东地区第13届实验动物科学学术交流会
论文部分内容阅读
本文为了构建牛皮蝇的皮蝇A(hyderminA,HA)基因的分泌型真核表达载体pEF1 α-HA-AcGFP,并在Cos7细胞中表达与鉴定,试验从牛皮蝇中提取RNA,反转录成cDNA,扩增出HA基因,并在HA序列的上游加一段信号肽序列.通过双酶切将带有信号肽的HA基因序列克隆到真核表达载体pEF1 α-IRES-AcGFP,得到重组真核表达载体pEF1 α-HA-AcGFP.利用脂质体法转染Cos7细胞,分别用RT-PCR和Western blot方法在RNA和蛋白水平上检测HA基因在Cos7细胞中的表达.结果表明:经双酶切及测序鉴定,分泌型真核表达载体pEF1α-HA-AcGFP构建成功,转染Cos7细胞后,在RNA和蛋白水平上检测到HA基因的表达.说明成功构建了HA基因的分泌型真核表达载体.
其他文献
目的：研究呼吸机管道热力消毒的效果及环节质量控制。方法：将污染的管道和湿化器各连接部位分离，送人Belimed250型清洗消毒器(德国贝力曼公司生产)，选择户程序，清洗、消毒、干燥整套程序由电脑自动控制操作完成。P3程序包括预洗、酶洗、二次漂洗、AO值3001)的热力消毒、干燥。干燥后用包装袋进行独立包装封口，存放备用。于消毒后1天、3天、5天、7天、10天、14天采样进行细菌培养。每套管道采集1
本文介绍了中医院实行临床科室满意度调查和供应室满意度调查二级满意度调查，实施二级满意度调查后临床科室对供应室满意度明显提高，特别是在物品供应的及时性和准确性、无菌物品质量方面显著升高;服务态度和与临床有效沟通方面也有明显的转变(P<0.05,差异有统计学意义)。从实施一级满意度调查，季度平均满意率均在90％左右，时高时低，呈波浪式。实施二级满意度调查后，季度平均满意率均在95%以上，且各季度呈逐步
本文介绍了密闭式硬质灭菌包装盒和孔眼式硬质灭菌包装盒的包装及灭菌方法，将已灭菌的密闭式灭菌盒和孔眼式灭菌盒在灭菌器内冷20-30min后取出，观察灭菌质量。以市场价格为参考值，分别测算两种灭菌包装盒的使用折旧费用(购置成本/折旧次数)、耗材成本、清洁及包装的人工成本、灭菌成本和维护成本，然后对比计算两种灭菌盒每次使用的综合性价比。结果表明，密闭式灭菌盒和孔眼式灭菌盒的灭菌效果都较可靠，但密闭式灭菌
目的：探讨巴戟天对微波辐射致大鼠睾丸损伤的作用.方法：成年雄性SD大鼠随机分为空白对照组(不辐射,不给药)、辐射组(辐射,不给药)、阴性对照组(辐射,灌胃等体积双蒸水)、巴戟天水提物组(辐射,灌胃巴戟天水提物)和巴戟天醇提物组(辐射,灌胃巴戟天醇提物).应用对讲机8h·d-1,辐射密度为300 μW·cm-2,频率409MHz,持续2w.末次辐射后第2d,巴戟天水提物组和巴戟天醇提物组分别给以巴戟
目的：研究产前缺氧与高脂血症对24周龄新西兰兔颈动脉形态学及相关介质水平影响.方法：同期怀孕的新西兰母兔(足月30±1 d)随机分为常氧对照组(n=5)、缺氧组(12％O2,n=5),于妊娠第10d开始相应的干预、记录,至妊娠第29 d结束,自然分娩.每窝随机留2只雄性新生兔饲养,共得20只雄性新生兔.母乳饲养6w后,再给予普通饲料喂养至12w,继之以高脂饲料喂养至24w.利用HE染色光镜观察24
目的：为获得更好的小鼠脑组织切片的观察定位和表达效果,对小鼠脑组织灌注方法做了些改进.方法：小鼠先经巴比妥纳麻醉,静脉输液器带针从小鼠心脏右心室部位进针,剪开右心耳,同时用止血钳扎住小鼠腹主动脉的灌注方式.结果：灌注所需的生理盐水和4％多聚甲醛的使用量明显减少,灌注时间缩短,小鼠大脑组织灌注充分,大脑显乳白色.结论：该方法灌注所需时间短,使用试剂量少,大脑组织血液冲洗干净,组织固定效果好,且操作过
本文构建血红素氧合酶-2(HO-2)真核表达载体pEF1 α-HO-2-AcGFP,并观察其在小鼠脑血管内皮细胞中的表达情况.利用PCR技术从C57BL/6小鼠海马组织中扩增出HO-2基因cDNA序列,用双酶切法将HO-2基因cDNA序列克隆到真核表达载体pEF1 α-IRES-AcGFP上,构建HO-2的真核表达载体pEF1 α-HO-2-AcGFP.重组载体pEF1 α-HO-2-AcGFP经