【摘 要】
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为了构建具有良好免疫原性的α-β1-β2融合蛋白.利用PCR技术,从含C型产气英膜梭菌a毒素基因的克隆质拉pETXAl中扩增出0.95 kb α毒素基因.将其连接到经Ncol单酶切并碱性磷酸酶处理的舍1.65 kb β1-β2融合基因的重组质料pETXB1B2上,构建含2.6 k α-β1-β2融合基因的表达质担重组菌株BL21(DE3)(pETXAB1B2).经酶切鉴定和序列测定证实,构建的重组
【机 构】
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大连大学 生物工程学院 生物有机化学辽宁省重点实验室,辽宁 大连 116622 武汉大学 生命科学学院 微生物学国家重点学科,湖北 武汉 430072
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会
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为了构建具有良好免疫原性的α-β1-β2融合蛋白.利用PCR技术,从含C型产气英膜梭菌a毒素基因的克隆质拉pETXAl中扩增出0.95 kb α毒素基因.将其连接到经Ncol单酶切并碱性磷酸酶处理的舍1.65 kb β1-β2融合基因的重组质料pETXB1B2上,构建含2.6 k α-β1-β2融合基因的表达质担重组菌株BL21(DE3)(pETXAB1B2).经酶切鉴定和序列测定证实,构建的重组质粒pETXAB1B2含有α-β1-β2融合基因,且基因序列和阅读框架正确.经ELISA检测,重组菌株表达的α-β1-β2融合蛋白能够被α、β1和β2毒素抗体识别.表达优化结果表明,以IPTG为诱导剂诱导α-β1-β2融合基因表达的优化条件是:培养基pH 7.5,培养温度37℃,IPTG浓度0.4 mmol·L-1,菌体生长密度OD600达到1.0时加入IPTG,诱导时间5 h,此时α-β1-β2融合蛋白表达量为31.2％.免疫试验结果表明,α-β1-β2融合蛋白免疫的小鼠可以抵抗1MLD(最小致死量,minimum lethal dose)C型产气英膜梭菌标准株C59-44毒素攻击,表明构建的重组菌株可以作为预防仔猪红痢基因工程亚单位苗的候选菌株.
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