【摘 要】
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目的：应用PCR-CE-RFLP方法直接检测女性生殖道标本中的细菌,为临床诊断提供快速、准确的依据,并逐步开发检测泌尿生殖道感染菌的基因芯片,用于临床诊断. 方法:利用细菌16Sr
【机 构】
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大连市妇产医院,大连,116021
【出 处】
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第二届全国现代免疫诊断技术学术研讨会
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目的：应用PCR-CE-RFLP方法直接检测女性生殖道标本中的细菌,为临床诊断提供快速、准确的依据,并逐步开发检测泌尿生殖道感染菌的基因芯片,用于临床诊断.
方法:利用细菌16SrRNA集保守性和变异性于一身的特点,合成一对通用引物,其上游5端用5-FAM标记.将8株已知菌株和38例临床诊断为生殖道炎症的女性生殖道拭子标本及其培养物进行PCR扩增,扩增产物经限制性内切酶HaeⅢ消化,然后进行毛细管电泳,通过限制性片断长度多态性(Restriction-Fragment-LengthPolymorphism,RFLP)分析来鉴定不同病原菌.
结果:①已知菌株PCR扩增阳性率为75﹪(6/8)、毛细管电泳阳性率为100﹪(6/6).②生殖道感染的标本pCR扩增阳性率为79﹪(30/38),毛细管电泳阳性率为100﹪(30/30).③已知菌株PCR扩增产物的5端HaeⅢ完全酶切片段的毛细管电泳结果,与电子克隆产物的酶切片段基本一致.④用传统培养检测法在生殖道常见的致病菌中,可检出有大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎克雷伯菌和鲍曼不动杆菌,本实验用PCR-CE-RFLP法同样也能检测出来.⑤本实验还发现数种传统培养法未检出的细菌(即未定菌).
结论:PCR-CE-RFLP法比传统的细菌培养法具有快速、准确、灵敏的优点,比传统方法缩短20小时,可用于临床标本的直接鉴定.
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