论文部分内容阅读
目的:探讨骨肉瘤病人血清中肿瘤微泡相关microRNA的表达水平,以及携带microRNA17-92信号的集群肿瘤微泡促进骨肉瘤转移的机制.
方法:收集骨肉瘤患者和健康志愿者(各10例)血清,高速离心提取血清中的微泡,流式细胞仪检测微泡的表达水平,并采用荧光定量PCR和基因芯片检测微泡中microRNA表达谱,筛选出差异性表达microRNA;用普通PCR和western blot检测增殖相关下游靶基因CDK4,CDK6,cyclinE2,P21,GADD45,Reprimo和凋亡相关下游靶基因Bax,Puma,Noxa,Fas,LIMA1,CAMK2N1的表达水平.培养人的骨肉瘤细胞HOS58,采用Lipofectamine 2000转染技术分别转入microRNA-18a和microRNA-106a,采用无限稀释法筛选阳性克隆,用MTT法检测HOS58细胞增殖,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡.
结果:发现骨肉瘤患者血清中肿瘤微泡水平明显增加,而健康者比例低,分别为18.7±2.1％和2.2±0.3(p＜0.05);荧光定量PCR和基因芯片检测均发现骨肉瘤患者血清中microRNA 17-92谱存在差异性表达,其中microRNA-18a和microRNA-106a水平明显上调,分别为2.3和1.97倍;普通PCR和western blot检测结果发现CDK4,CDK6,cyclinE2和P21,Reprimo明显上调,凋亡基因Bax,Puma,Noxa,Fas无明显改变,而LIMA1,CAMK2N1明显下调.采用脂质体2000成功转入microRNA-18a和microRNA-106a到人的骨肉瘤细胞HOS58,其转染率分别是34.6％和37.8％,建立阳性克隆细胞后发现转染microRNA-18a的HOS58细胞增殖明显加速,而凋亡改变不大,而转染microRNA-106a的HOS58细胞增殖加速,且具有明显的抗凋亡作用.
结论:负载microRNA18a/106集群的肿瘤微泡在骨肉瘤通过促进细胞增殖和/或抑制细胞凋亡促进肿瘤的转移,靶向性阻断有望为骨肉瘤提供更有效的治疗方法.