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目的建立体外Balb/c 3T3成纤维细胞中性红摄取试验(3T3 NRU PT),研究其作为化学品安全性评价中替代动物光毒性试验的可行性,从而为制定和完善新的检测标准和规范提供依据。方法(1)Balb/c 3T3细胞经过UVA不同照射剂量照射后,用中性红摄入法测定不同照射剂量的细胞活力;(2)选取十二烷基硫酸钠(SDS),8-甲氧基补骨脂(8-MOP),盐酸氯丙嗪(CPZ)作为受试物,按照OECD"化学品测试导则432"的推荐方法,将Balb/c 3T3成纤维细胞接种于96孔细胞培养板,24 h后,每一种受试物经预试验后设立8个浓度组,处理细胞1h后,随机选择一块培养板用紫外照度计(Bio-spectra system,法国VILBER LOURMAT公司),选UVA光源(365nm)进行紫外线照射(+Irr),照射剂量为5J/cm~2,另一平行板置于黑暗中不照射(-Irr)作为对照。照射结束后,洗去受试化学物,孵育24h后换中性红培养液培养3h,洗去培养基,加入中性红解吸附液,在540nm处酶标仪测定NRU的吸光度值。根据测定的吸光度值,使用PHOTO32软件分别建立平均光效应(MPE值)和光刺激因子(PIF值)预测模型,以判断所测物质是否具有光毒性.结果(1)随着照射剂量的增加,细胞存活率逐渐降低,照射剂量为5、7.5、10、15、20J/cm~2时,细胞存活率分别为91.4%、77.0%、72.3%、40.2%和18.8%; (2)3T3 NRU PT试验测得SDS、8-MOP、CPZ的PIF值分别为0.89、22.81和17.60;MPE值分别为0.001、0.706和0.502,按该试验阈值分类方法,SDS为无光毒性物质,8-MOP、CPZ均具有光毒性.结论通过正常3T3细胞经紫外线照射后细胞存活率的比较发现,照射剂量为5J/cm~2时细胞的存活率高于90%,但剂量达7.5J/cm~2时细胞存活率就低于80%,显示出一定的细胞毒性,故照射剂量应不高于5J/cm~2为宜,结果同欧洲的多个实验室的结果基本一致;通过3T3 NRU PT对目前已知的阳性物8-MOP、CPZ及阴性物SDS的检测得出一致的结论,本实验室成功地建立了3T3 NRU PT,本实验室成功地建立了3T3-NRU PT,并在照射剂量控制等方面进行了探索,从而为化学品安全性评价提供依据。