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目的:硫酸角质素(KS)是角膜组织中一种独特的糖胺,对维持角膜透明性起重要作用.KS的合成主要是由角膜基质细胞调控,在角膜损伤愈合及瘢痕形成时减少甚至消失,这一病理机制尚不明确.调控角膜KS延长及硫化的酶亦不明确.角膜基质干细胞不表达KS,但可分化为角膜基质细胞并合成KS.根据该特点我们研究KS生物合成及其相关酶的调控机制,拟明确角膜基质干细胞在分化为角膜基质细胞时角膜KS的生物合成机制及其基因调控.方法:分离培养原代牛角膜基质细胞;分离培养人角膜基质干细胞并体外诱导分化为角膜基质细胞.运用RT-PCR检测糖基转移酶(GTase)和琉基转移酶(STase)基因的mRNA水平的表达.实施RNA干扰抑制特异基因mRNA表达以确定参与调控KS的生物合成酶.GTase和STase的表达通过realtimePCR及Westernblot检测技术确定.运用免疫印记检测技术检测KS的表达.结果:在新鲜分离牛角膜基质细胞中检测到1 5种GTase和GTase基因的mRNA表达.抑制两种STase基因(CHST6 and CHST1)和一种glucosaminyltransferase基因((B3GnT7)显著抑制角膜KS合成.当角膜基质干细胞分化为角膜基质细胞时,伴随角膜KS的合成,CHST6和B3GnT7的mRNA的表达显著增加;免疫印记检测表明CHST6和B3GnT7的蛋白水平的表达亦显著增加.结论:多基因参与角膜KS生物合成,但其中两种酶CHST6和B3GnT7在角膜基质细胞合成KS中起主要作用.该研究结果有益于全面理解角膜基质损伤愈合病理机制并为今后运用组织工程技术实施生物合成角膜基质提供理论依据.