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本实验旨在利用高产中性蛋白酶的菌株对血粉进行发酵,摸索血粉发酵的最佳发酵条件,为饲料级血粉开发技术的研究积累数据和提供依据。实验利用紫外诱变方法对枯草芽孢杆菌进行紫外诱变,并通过比较透明圈直径与菌落直径的比值(HC值)、中性蛋白酶活力、在血粉发酵培养基发酵条件下的中性蛋白酶活力,最终筛选出一株蛋白酶酶活较高、遗传稳定性良好的突变菌株UV-13。突变菌株UV-13在发酵血粉培养基发酵液中蛋白酶酶活力为228U/ml,相比出发菌株中性蛋白酶酶活力提高70.9%。对突变菌种的中性蛋白酶酶学性质进行探讨,实验结果表明,最适温度为50℃,最适pH值为6.5,在50℃保温120min,酶活为初始酶活的65%。以突变菌株为发酵菌种,分别以接种量、摇床转速、pH值、温度、时间为单因子,以发酵液水解度为测定指标,分别进行5次7水平的单因素实验。对单因素实验结果进行分析,确定3个影响发酵液水解度的关键因素,利用Design Expert根据Box-Behnken中心组合设计原理,采用响应面分析,建立水解度与各关键因素的数学模型,通过计算分析优化发酵猪血粉的最佳发酵条件为:发酵温度33.8℃,发酵时间69.4h,初始pH值7.0,接种量4%,摇床转速250r/min,在此发酵条件下发酵液水解度为62.05%。以上结果表明,紫外诱变技术可用来优化选育高产蛋白酶菌株;可利用响应面法对血粉的发酵条件进行优化,从而提高血粉的发酵效果;血粉经发酵后大分子蛋白在较大程度上降解为小分子蛋白及氨基酸并且去除血粉原有的血腥味,可在一定程度上提高血粉的消化率以及动物适口性;发酵血粉由于含有大量枯草芽孢杆菌菌体蛋白,可在一定程度上改善血粉氨基酸平衡性不佳的缺点;枯草芽孢杆菌作为一种公认安全(GRAS)的细菌对动物机体具有改善消化道微环境、增强畜禽免疫力等功能,在饲料中添加枯草芽孢杆菌发酵血粉对动物具有诸多益处。