【摘 要】
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根据PCV2ORF2基因的序列设计两条引物从PCV2的PK15细胞培养物中扩增出ORF2基因(702bp).将此基因片段克隆入pMD18-T载体,经酶切、测序鉴定筛选出重组质粒pMD-ORF2.将PCV2ORF2基因克隆入pAdeasy腺病毒载体系统的穿梭质粒pAdTrack-CMV中,获得重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-ORF2,将重组质粒与腺病毒骨架载体共转化大肠杆菌BJ5183,通过细
【机 构】
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广东省农科院兽医研究所,广州,广东,510640 广东省农科院兽医研究所,广州,广东,510640
【出 处】
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中国畜牧兽医学会第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会
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根据PCV2ORF2基因的序列设计两条引物从PCV2的PK15细胞培养物中扩增出ORF2基因(702bp).将此基因片段克隆入pMD18-T载体,经酶切、测序鉴定筛选出重组质粒pMD-ORF2.将PCV2ORF2基因克隆入pAdeasy腺病毒载体系统的穿梭质粒pAdTrack-CMV中,获得重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-ORF2,将重组质粒与腺病毒骨架载体共转化大肠杆菌BJ5183,通过细菌内同源重组获得重组腺病毒质粒pAdCMV-ORF2,然后用PacI线性化后转染293细胞,在293细胞内包装出重组腺病毒.通过荧光显微镜观察、PCR检测和Westernblot检测证明PCV2ORF2基因在293细胞内获得表达,ORF2多肽具有良好的免疫原性。
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