【摘 要】
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Since April 2010,domesticated ducks in China have been suffering from an emerging infectious disease characterized by retarded growth,high fever,loss of appetite,decline in egg production,and death.
【机 构】
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Shanghai Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Shanghai,People’s Re
【出 处】
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中国畜牧兽医学会禽病学分会第三届全国禽病分子生物技术青年学术论坛
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Since April 2010,domesticated ducks in China have been suffering from an emerging infectious disease characterized by retarded growth,high fever,loss of appetite,decline in egg production,and death.
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为建立快速检测鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)抗体的血清学方法,以及对鸭坦布苏病毒病进行血清流行病学调查,本研究以原核表达纯化的鸭坦布苏病毒ED3 蛋白为包被抗原,建立了检测鸭坦布苏病毒抗体的间接ELISA 诊断方法。
为了检测鸭群中鸭坦布苏病毒的血清学流行情况，本研究在前期成功表达鸭坦布苏病毒NS1 蛋白的基础上，建立了检测鸭血清中鸭坦布苏病毒抗体的间接ELISA 方法。
本研究以鹅坦布苏病毒(goose Tembusu virus,GTMUV)囊膜蛋白(Envelope,E)基因序列为基础,采用Garnier_Robson 方法、Chou_Farplus 方法和Karplus_Schulz 方法预测了其结构蛋白的二级结构。用Kyte_Doolittle 方法对结构蛋白的亲水性进行了分析,用Emini 方法预测了结构蛋白的表面可能性,以Jameson_Wolf 方法
为建立快速检测鸭坦布苏病毒病抗体的血清学方法本研究利用鹅坦布苏病毒JS804 株非结构蛋白NS1基因序列将其克隆至原核表达载体pET32a 上,建出重组表达pET32a-NSI,转化至BL21(DE3)中。
为了解我国鸡群感染禽坦布苏病毒的情况，应用已建立的间接酶联免疫吸附试验(间接ELISA)对于2010 年12 月-2013 年9 月近三年内采自福建、江西、浙江、广东四省发生产蛋异常鸡场的开产蛋鸡、后备蛋鸡的血样共2310 份进行禽坦布苏病毒抗体的检测，并对结果进行了分析。
为了解引起鸡产蛋骤降的坦布苏病毒全基因组分子特征，本研究运用RT-PCR 技术测定了2 株坦布苏病毒鸡源分离株全基因组序列。
禽坦布苏病毒病是新发的可引起家禽产蛋和采食量下降及死亡的一种疫病。本研究旨在建立一种快速诊断方法用于临床诊断及流行病学调查。根据GenBank发表的鹅坦布苏病毒JS804株全基因序列，设计了2对特异性引物，建立了禽坦布苏病毒套式RT-PCR检测方法。
某种鹅场出现母鹅产蛋率降低、脱肛，公鹅阴茎脱垂，死淘率过高，鹅胚受精率降低，孵化全程死胚率升高，孵化出的雏鹅弱雏比例升高。
利用PCR 方法扩增得到目的片段，并引入FLAG 标签序列(DYKDDDDK)，构建重组表达质粒pET28a-E-I/II.转化至BL21(DE3)中，经IPTG 诱导表达目的蛋白质，并对其进行SDS-PAGE 分析和Western-blot 鉴定.
采用RT-PCR 方法扩增出了鹅坦布苏病毒的E 蛋白结构域Ⅲ,将其分别克隆至表达载体pET32a(+)和pET28a(+)中,构建了重组表达质粒pET32a-EⅢ和pET28a-EⅢ,转化入大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG进行诱导表达。