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目的:研究中药片仔癀对骨肉瘤U-2OS细胞的诱导凋亡作用。
方法:(1)培养人骨肉瘤U2-OS细胞.(2)筛选对骨肉瘤U2-OS细胞作用最佳的片仔癀含药血清。(3)在倒置相差显微镜和光镜下观察骨肉瘤U2-OS细胞形态,用MTT法测细胞活力·(4)原位末端标记:骨肉瘤细胞胰酶消化置于左旋多聚赖氨酸铺片上至细胞贴壁;在超净台内风干,室温固定25min。PBS通透液促渗5min,滴加Equilibration Buffer100 μ1覆盖细胞。含rTdT酶的TUNEL反应液37℃,湿润避光反应60分钟。新鲜配制DAB工作液显色反应,光镜观察。(5)提取基因DNA,将10uDNA样品加入2μ1的10×LoadingBurffer,混匀,立即加到含有0.4μg/ml溴化乙啶的1%琼脂糖凝胶电泳,室温,1小时.紫外线灯下观察,凝胶成像系统扫描存盘。以DNA琼脂糖凝胶电泳和透射电镜检测细胞凋亡。
结果:实验组TUNEL检测阳性,琼腊糖凝胶电泳出现DNA的片段化,随着作用时间延长和浓度增加,凋亡率增高;电镜观察染色质沿皱缩的核膜下凝聚,细胞表面出现凋亡小体。
结论:中药片仔癀胶囊对骨肉瘤U-2OS细胞有抑制增殖和诱导凋亡作用.