【摘 要】
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糖胺多糖作为蛋白聚糖的组成成分,主要分布在细胞外基质和细胞表面,用来指导很多生物过程.由于CS的分子量大,生物利用度低,使得其很多功效不能得到有效的发挥,很多研究表明酶法制备低分子量的CS可以有效克服以上缺点,因此制备低分子量的CS具有重要意义.硫酸软骨素裂解酶(chondroitinase,ChSase)是一类能将CS、软骨素、透明质酸等糖胺聚糖降解为不饱和二糖及寡糖的裂解酶.本研究首次将ChS
【机 构】
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北京化工大学 北京电子科技职业学院
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糖胺多糖作为蛋白聚糖的组成成分,主要分布在细胞外基质和细胞表面,用来指导很多生物过程.由于CS的分子量大,生物利用度低,使得其很多功效不能得到有效的发挥,很多研究表明酶法制备低分子量的CS可以有效克服以上缺点,因此制备低分子量的CS具有重要意义.硫酸软骨素裂解酶(chondroitinase,ChSase)是一类能将CS、软骨素、透明质酸等糖胺聚糖降解为不饱和二糖及寡糖的裂解酶.本研究首次将ChSase ABC I与MBP融合表达.为了确定高产融合蛋白MBP-ChSase ABC I的菌株,对大肠杆菌表达菌株进行了优化,优化了DH5α,BL21等5种菌株,发现最高产的菌株为BL21(DE3),在未优化培养基的前提下,产量可达到3180 IU/L发酵液,是目前报道的最高水平.并对融合蛋白的酶活性质进行检测,与ChSase ABC I相对比,发现MBP-ChSase ABC I的最适温度为50度,比文献报道的ChSase ABC I最适温度高,最适pH为7.73,与文献报道的ChSase ABC I最适pH类似.同时对融合蛋白MBP-ChSase ABC I的热稳定行进行了研究,发现其在30度下,210min后酶活可保留78％,在45度和50度,30min后酶活仅剩下10％.His标签是工业异源表达蛋白常用的标签,但His标签对异源蛋白的表达及酶性质的影响不是很明确.本研究基于酶学性质研究了His标签对ChSase ABC I的影响.结果发现,His-ChSase ABC I的比酶活为201.9IU/mg蛋白,比ChSase ABC I低两倍.同时用多角度静态光散射和分析型超速离心的方法检测了His-ChSase ABC I和ChSase ABC I的分子量,发现His标签未对ChSase ABC I的聚合状态产生影响.His标签未对最适温度产生影响,对最适pH有一定影响.His标签降低了ChSase ABC I的催化效率,并对其二级结构产生了影响,β-转角提高,无规卷曲降低.本研究对异源表达酶在工业化上的应用有一定的指导意义.
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