目的:动脉粥样硬化和血管退行性病变是导致心血管疾病的主要病因。炎症反应是导致动脉粥样硬化和血管退行性病的病理基础。本研究以SIRT1基因外显子来源的环状非编码RNA circ-Sirt1为研究对象,从体内外研究证实circ-Sirt1在血管炎症应答中的作用和分子机制。方法:利用野生型SD大鼠建立颈动脉损伤狭窄模型,采用实时荧光定量PCR和Western Blot方法评价circ-Sirt1、SIRT1与血管炎症损伤的关系;应用荧光素酶报告基因分析和RNA pull-down技术,确定circ-Sirt1对Sirt1 mR NA的转录后调控作用;利用RNA pull-down和RIP技术找出并确定与circ-Sirt1相互作用的蛋白质,从RNA与蛋白互作角度探讨circ-Sirt1对经典炎症信号途径NF-κB活化及核转位的影响。结果:1、circ-Sirt1参与调节血管炎症应答:建立SD大鼠颈动脉损伤模型,取损伤后7 d、14 d、28 d大鼠血清和血管组织,qP CR结果显示,circ-Sirt1表达活性逐渐降低。选取临床高血压伴肾切除患者的肾动脉进行组织切片,HE染色结果显示,高血压患者肾动脉呈明显的内膜增生。qP CR和组织原位杂交结果显示,circ-Sirt1在新生内膜中表达降低,炎症标志分子VCAM-1、ICAM-1和MCP-1表达上调。过表达circ-Sirt1可抑制TNF-α诱导的平滑肌细胞炎症反应。2、circ-Sirt1抑制转录因子NF-κB核转位:NF-κB作为体内炎症反应的重要转录调控因子,在炎症激活过程中处于核心位置。RNA pull-down和RIP结果显示circ-Sirt1与转录因子NF-κB p65存在相互作用。胞浆胞核分离、qR T-PCR、原位杂交结果显示,circ-Sirt1主要定位于细胞浆,过表达的circ-Sirt1通过与NF-κB p65结合,阻止TNF-α诱导的NF-κB核转位,抑制炎症因子表达。catR APID软件预测分析出circ-Sirt1可能与NF-κB p65结合的两个位点。RIP和RNA pull-down结合qP CR结果显示,circ-Sirt1过表达后与NF-κB p65相互作用增强,对结合位点进行反义封闭,能抑制二者的相互作用。3、circ-Sirt1正调控SIRT1蛋白表达:对VSMCs敲低和过表达circ-Sirt1,q RT-PCR和Western blot结果表明,circ-Sirt1能在转录后水平正向调控SIRT1表达。生物信息学预测发现circ-Sirt1上存在3个miR-132/212-3P潜在结合位点。miR-132/212-3p体内直接靶分子为Sirt1 mR NA。荧光素酶报告基因分析、RNA-pull down结合qR T-PCR证实,circ-Sirt1在细胞内直接与mi R-132/212-3P相互作用。即circ-Sirt1对miR-132/212-3p有分子海绵效应。4、circ-Sirt1介导的SIRT1表达促进NF-κB p65去乙酰化失活:实验结果显示,circ-Sirt1介导的NF-κB p65核转位抑制是不完全的,与被p65所调控炎症分子ICAM等的表达减少程度之间存在很大差距。推测这种差距,是因为已发生核转位的NF-κB p65的活性受到抑制所导致。Ch IP、DNA pull-down和荧光素酶报告基因分析结果显示,过表达circ-Sirt1的VSMCs细胞核中NF-κB p65的DNA结合活性受抑制。胞浆胞核分离、qP CR及免疫共沉淀结果显示,circ-Sirt1过表达的细胞中,TNF-α诱导的NF-κB p65乙酰化受抑制,与增加的SIRT1与NF-κB p65相互作用相吻合。结论:1、血管损伤重塑过程中炎症因子表达增加,circ-Sirt1表达下调;2、circ-Sirt1作为"分子海绵"吸附miR-132/212-3P,解除其对SIRT1 mR NA的抑制作用,上调SIRT1表达;3、circ-Sirt1与NF-κB相互作用,锚定胞浆NF-κB p65,抑制炎症诱导的p65核转位及炎性因子表达;4、circ-Sirt1通过正向调节SIRT1蛋白表达促进NF-κB p65去乙酰化失活。