小儿白血病是我国儿童期发病率最高的恶性肿瘤,大剂量甲氨喋呤（HDMTX）方案是防治髓外白血病公认的有效方法。由于人体肠道粘膜细胞和肠腔细菌增殖和更替快,HDMTX在杀灭肿瘤细胞的同时也可能造成肠腔细菌大量死亡,且肠粘膜的破坏使肠道菌群失去了赖以定植和生存的界面,可引起菌群失调,从而影响白血病患儿的病情和预后。 目的：研究HDMTX 化疗急性淋巴细胞白血病（ALL）患儿肠道菌群的变化,并和健康儿童进行比较。从微生态的角度分析HDMTX 化疗与肠道菌群变化的相互关系。为微生态制剂用于HDMTX 化疗副作用的预防和治疗提供依据。 方法：收集36 名HDMTX 化疗前后ALL 患儿及36 名健康对照组儿童的粪便标本,并提取目标细菌DNA。用分子生物学专用分光光度仪进行DNA的OD 值测量。用细菌的16SrRNA/DNA 序列设计双歧杆菌、乳酸杆菌和大肠杆菌的引物,行常规PCR 完成细菌的定性,然后取准确定量的两种细菌DNA,经系列稀释后做荧光定量PCR,制作出标准曲线,待测样品同时进行荧光定量PCR 反应,并和标准曲线进行比较,获得各样品中两种细菌的量。 结果： ALL组HDMTX 化疗前1天、化疗后第3天、化疗后第7天和对照组儿童的粪便标本中细菌DNA的OD260 值分别为2436.3+768.6ng/μl,1496.5+577.1ng/μl,1966.6+598.3ng/μl,3479.3+870.5ng/μl。ALL组HDMTX 化疗前1d、化疗后第3d、化疗后第7d和对照组的肠道双歧杆菌数量的对数值分别为7.24±0.33、6.00±0.27、6.59±0.33和9.49±0.41；乳酸杆菌数量的对数值分别为8.10±0.43、6.73±0.45、7.45±0.43和9.12±0.50；大肠杆菌数量的对数值分别为6.62±0.4,5.96±0.42,7.02±0.42,7.52±0.43。对照组的肠道双歧杆菌、乳酸杆菌和大肠杆菌均较ALL组高(F=739.61,88.67,P 均<0.01)。ALL组化疗前和后,大便标本中双歧杆菌、乳酸杆菌和大肠杆菌数量变化差异有统计学意义(P 均﹤0.01）,其中化疗第3d 下降最明显,第7d 有所回升。 结论：（1）HDMTX 化疗方案对ALL 患儿肠道双歧杆菌、乳酸杆菌和大肠杆菌有明显影响,化疗后数量显著下降；（2）ALL 患儿肠道菌群和健康儿童相比有显著差异,益生菌明显减少。