【摘 要】
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为了研究猪圆环病毒2型(PCV2)核疫苗,本研究采用重叠延伸PCR(splicing by overlap extension-PCR,SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头(linker)将PCV2的ORF2全长基因和猪白介素2
【机 构】
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河南省动物疫病预防控制中心,河南郑州,450008
【出 处】
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中国畜牧兽医学会2008年学术年会暨第六届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会
论文部分内容阅读
为了研究猪圆环病毒2型(PCV2)核疫苗,本研究采用重叠延伸PCR(splicing by overlap extension-PCR,SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头(linker)将PCV2的ORF2全长基因和猪白介素2成熟肽基因(Poll-2)构建成PCV2-linker-PoIL-2嵌合基因并克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体中；筛选阳性重组表达质粒(rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2)转染COS-7细胞,分别采用PCV2抗原间接免疫荧光试验和PoIL-2蛋白ELISA试验方法检测COS-7细胞中表达的重组融合蛋白(rCap-linker-PoIL-2)生物学活性；提取rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2和只含PCV2 ORF2基因的重组表达质粒pcDNA3.1/OFR2(rpcDNA3.1/OFR2)免疫Balb/c小鼠和猪并检测其免疫效果。结果表明:成功构建了PCV2-linker-PoIL-2嵌合基因及其pcDNA3.1(+)重组表达质粒；rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2在COS-7细胞浆内进行了表达,表达的rCap-linker-PoIL-2可分别与抗PCV2和抗PoIL-2蛋白抗血清发生特异性免疫反应,表明rCap-linker-PoIL-2蛋白具有Cap蛋白和PoIL-2蛋白的双重生物学活性；rpcDNA3.1/PCV2-linker-Poll一2质粒免疫小鼠后可诱导小鼠和猪体产生明显的抗PCV2抗体,且其诱导的抗体水平明显高于rpcDNA3.1/OFR2.本研究为PCV2的DNA疫苗研究奠定了基础.
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