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目的：骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)在人类乳腺癌细胞中高表达,并可能参与了某些肿瘤细胞血管生成拟态(Vasculogenic mimicry,VM)的形成.在本项研究中,我们调查OPN是否在乳腺癌细胞的VM形成中起作用,并探讨OPN和VM形成相关蛋白MMP-9和VEGF之间是否有关联.方法：1、运用脂质体转染技术,将针对OPN编码基因的不同序列的重组质粒miR-opn1、miR-opn2、miR-opn3、miR-opn4分别转染至人乳腺癌细胞株MDA-MB-231中,WB检测挑选沉默效率最高的质粒进行后续实验.2、实验分组：正常组(control)、转染试剂对照组(LipLTX)、阴性质粒对照组(miR-neg)和转染组(miR-opn2),分别转染乳腺癌细胞株30h后,收集细胞进行体外三维培养,24h后倒置显微镜下观察各组VM的数量,并通过PAS染色证实VM的存在.3、三维培养24h后,提取各实验组细胞,用RT-PCR、Western Blot技术测定OPN、MMP-9和VEGF的mRNA和蛋白质的表达量.结果：1、miR-opn1、 miR-opn2、miR-opn3和miR-opn4分别转染至人乳腺癌细胞株MDA-MB-231中,荧光显微镜观察结果和WB实验结果显示,miR-opn2质粒的沉默效率较其他组高,可进行后期实验.2、转染组(miR-opn2)的MDA-MB-231细胞株形成VM的数量比正常组、转染试剂对照组、阴性质粒对照组的明显减少(P＜0.05),正常组、转染试剂对照组、阴性质粒对照组组间相比无显著性差异,说明OPN参与了MDA-MB-231细胞株的VM形成.3、转染组(miR-opn2)的MDA-MB-231细胞株OPN、MMP-9和VEGF的mRNA和蛋白表达水平均比正常组、转染试剂对照组、阴性质粒对照组(miR-neg)明显下降(P＜0.05),正常组、转染试剂对照组、阴性质粒对照组(miR-neg)组间相比无显著差异,提示OPN参与VM的形成很可能是通过影响VM生成相关蛋白MMP-9和VEGF实现的.结论：1、体外三维培养模型中人乳腺癌细胞株MDA-MB-231能够形成典型的PAS染色阳性的VM现象.2、靶向沉默OPN蛋白能够有效抑制体外三维培养模式中MDA-MB-231形成VM的数量,提示OPN蛋白参与了VM的形成.