【摘 要】
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目的 探讨羟基脲(Hydroxyurea,HU)对雄性FasL转基因型(TG)及野生型(WT) DBA/C57BL小鼠生精细胞凋亡的作用机制.方法:实验组的WT和TG小鼠分别腹腔注射400mg/kg HU,即WT +HU
【机 构】
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上海计划生育科学研究所药理毒理学研究室,中国生育调节药物毒理检测中心,上海 200032
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目的 探讨羟基脲(Hydroxyurea,HU)对雄性FasL转基因型(TG)及野生型(WT) DBA/C57BL小鼠生精细胞凋亡的作用机制.方法:实验组的WT和TG小鼠分别腹腔注射400mg/kg HU,即WT +HU组和TG+ HU组,对照组的WT和GT小鼠注射相同体积PBS,即WT组和TG组.注射后12小时,处死动物取两侧睾丸,左侧睾丸用Bouins液固定,观察形态学变化并进行原位细胞凋亡检测(TUNEL染色).右侧睾丸放入液氮中冷冻,然后贮存于-80℃直至进一步的分析.结果:雄性FasL转基因型(TG)及野生型(WT) DBA/C57BL小鼠的(2×2)析因设计对比研究表明:TG小鼠生精小管的本底细胞凋亡水平增高,Fas、FasL mRNA以及Fas、FasL、Caspase-3、Caspase-9蛋白的本底表达水平也稍有增加.腹腔注射400/kg HU 12h后,WT和TG小鼠睾丸生精小管形态无明显变化,但曲细精管细胞凋亡指数明显增加,且TG小鼠较WT小鼠增加幅度更大.另外,虽然HU在TG及WT小鼠中均可诱发睾丸的DNA片段化和细胞凋亡相关基因Fas、FasL mRNA表达的i调;但与WT小鼠相比,TG小鼠的增加幅度更为明显.Western印迹分析显示,HU处理对WT和TG小鼠的凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9表达无明显影响,但可引起Fas、FasL、和Caspase-8等蛋白表达明显上调,且TG小鼠的上调幅度高于WT小鼠.结论:HU仵用于FasL转基因型小鼠后引起的生精细胞凋亡显示可能与FasL介导的信号转导途径有关.
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