【摘 要】
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本研究为了构建莫氏巴贝斯虫(Babesia motasi)裂殖子cDNA表达文库,从中筛选和鉴定功能基因,利用差速离心法从莫氏巴贝斯虫感染的红细胞中纯化裂殖子,提取总RNA并纯化mRNA.在合成的双链cDNA两端加上含EcoRⅠ和HindⅢ定向接头后连接到λSCREEN载体上.通过体外包装形成完整的噬菌体颗粒,并用之转染ER1647,构建莫氏巴贝斯虫裂殖子的cDNA表达文库.用莫氏巴贝斯虫阳性血清
【机 构】
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中国农业科学院兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学国家重点实验室 甘肃省动物寄生虫病重点实验室,甘肃 兰州730046
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会
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本研究为了构建莫氏巴贝斯虫(Babesia motasi)裂殖子cDNA表达文库,从中筛选和鉴定功能基因,利用差速离心法从莫氏巴贝斯虫感染的红细胞中纯化裂殖子,提取总RNA并纯化mRNA.在合成的双链cDNA两端加上含EcoRⅠ和HindⅢ定向接头后连接到λSCREEN载体上.通过体外包装形成完整的噬菌体颗粒,并用之转染ER1647,构建莫氏巴贝斯虫裂殖子的cDNA表达文库.用莫氏巴贝斯虫阳性血清筛选cDNA文库,获得的阳性克隆,经过测序和Blast软件分析鉴定,然后利用末端快速扩增技术(RACE)对筛选到的功能基因片段进行全长扩增.结果显示,构建的cDNA表达文库其初级库容量约为1.0×106PFU,扩增文库为3.5×109 PFU;通过免疫学筛选,获得50个阳性克隆.测序和Blast分析后,鉴定出10个莫氏巴贝斯虫基因片段(如Hsp90、Rab1b、p200、GAP45、cyp、Histone H2A以及一些膜蛋白和假定蛋白基因),RACE扩增获得了其中8个基因的全长.本试验构建的莫氏巴贝斯虫裂殖子的cDNA表达文库和筛选到的10个结构和功能基因,为研究巴贝斯虫生物学特性、筛选疫苗与诊断用抗原及药物靶位奠定了基础.
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