Cdh5基因在Hoxb4特异性过表达转基因斑马鱼胚胎期造血发育中表达分析及对造血发育影响的研究

来源 :第十七届全国小儿血液病学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:nibuhao222
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目的:转录因子hoxb4可促进造血干细胞增殖的正向调节,在增加干细胞数量的同时可几乎不影响其分化,其机制可能与上下游基因的功能有关,但至今尚不明确.本实验选择cdh5为研究对象,探究cdh5基因在hoxb4过表达转基因斑马鱼胚胎期造血组织中的表达情况;并且在野生型斑马鱼胚胎中过表达cdh5基因,研究其对造血发育的影响,并探讨cdh5基因与hoxb4基因可能的调控关系. 方法:收集HoxB4实验组和egfp对照组转基因斑马鱼18hpf、24hpf、30hpf、36hpf、48hpf、72hpf的胚胎,流式细胞仪分选阳性细胞,提取各标本总RNA制备cDNA,用实时荧光定量PCR的方法检测标本中cdh5基因在mRNA水平的表达量:构建edh5基因全长表达质粒并测试表达情况,体外转录成mRNA,经显微注射的方法将其导入单细胞期斑马鱼胚胎,收取早期发育节点的阳性胚胎,提取各时间点标本总RNA制备cDNA,经实时荧光定量PCR检测原始造血和成体造血标致基因mRNA水平的表达量。 结果:成功分选出了目的细胞,提取其总RNA,并逆转制备了cDNA。 结论:hoxb4过表达转基因斑马鱼胚胎期造血组织中cdh5的表达量明显升高,高水平表达的时程明显延长。成功的构建了cdh5-egfp pCS2+全长重组质粒,制备出了cdh5-egfp的mRNA,在野生型斑马鱼胚胎中过表达cdh5时可以引起原始造血增强;成体造血的早期阶段也明显增强。在斑马鱼胚胎过表达Hoxb4可以引起造血组织cdh5表达增强,在野生型斑马鱼胚胎中表达cdh5可以产生与过表达hoxb4类似的造血增强效应,cdh5基因可能是hoxb4基因的下游靶基因,共同参与了胚胎早期阶段造血发育的调控。
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