背景与目的:肺癌是当今世界最常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率在世界各国均呈明显上升趋势,更由于其难于早期发现、诊断和治疗,严重的威胁人类健康.目前肺癌的主要治疗手段仍是手术、化疗和放疗,总体疗效并不如人意.尤其对于一些晚期肺癌患者,因失去手术机会往往需要大剂量的化疗来延长生存期,而化疗药显著的毒副作用也是患者备受痛苦.本研究旨在在分析和鉴定对吉非替尼敏感和耐药的人肺腺癌细胞株耐药性差异的基础上，建立对吉非替尼敏感和耐药的人肺腺癌细胞株的microRNA表达谱，从中筛选出与人肺腺癌细胞吉非替尼耐药密切相关microRNA，为深入研究人肺癌吉非替尼敏感和抗性的分子标志物、指导肺癌的“个体化”治疗方案奠定基础。 方法:本研究以Gefitinib高度敏感的PC9细胞以及由PC9细胞经过MNNG诱变筛选得到的具有不同吉非替尼IC50的三株耐药细胞株PC9/AB2,PC9/ABll,PC9BB4为研究对象，通过倒置显微镜观察四株细胞的形态学差异、细胞计数法绘制细胞生长曲线并计算细胞倍增时间、流式细胞术检测四株细胞的周期分布、MTT法检测吉非替尼对四株细胞的IC50等方法，鉴定敏感株PC9细胞与三株耐药细胞间的生物学特性和耐药性的差异，以及三株耐药株之间的生物学特性和耐药性的差异，在此基础上进一步应用microRNA表达谱芯片技术，筛选鉴定与人肺腺癌细胞吉非替尼耐药相关的差异micraRNA表达谱。构建与吉非替尼获得性耐药相关的microRNA表达载体及对照载体，转染耐药细胞株，筛选与获得性耐药产生机制相关的microRNA。 结果:(1)耐药细胞株PC9/AB2, PC9/AB11，PC9BB4与敏感细胞株PC9相比，PC9BB4细胞形态变化较明显，胞体细长:与敏感株PC9细胞相比，PC9/ABll在GO/G1期的分布显著高于PC9(P=0.009)，PC9/AB2,PC9BB4在GO/G1期的分布显著低于PC9细胞(P均为0);PC9/AB1l细胞在G2/M期的分布与PC9细胞无显著差异，PC9BB4细胞在G2/M期的分布显著低于PC9细胞(P=0.031)，PC9/AB1l细胞在G2/M期的分布显著低于PC9细胞;PC9/ABll细胞在S期的分布显著低于PC9细胞(P=0.003)，PC9BB4细胞在S期的分布显著高于PC9细胞，PC9/ABll细胞在S的分布显著高于PC9细胞;细胞的倍增时间有显著延长。 结论:吉非替尼敏感的人肺癌细胞株及其衍生的吉非替尼获得性耐药细胞株具有不同的吉非替尼IC50，获得性耐药细胞的吉非替尼IC50明显增高。获得性耐药细胞株和吉非替尼敏感细胞株的microRNA表达谱具有显著差异。获得性耐药细胞株中低表达的miR-5O,miR-38可能与吉非替尼的获得性耐药有关。