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目的:建立12h内快速检测粪便中沙门菌、志贺菌和大肠杆菌O157:H7的多重PCR方法。
方法:探讨已报道的多重PCR体系检测粪便中3种目的菌的可行性,根据沙门菌invA基因、志贺菌ipaH基因及大肠杆菌O157:H7rfbE基因筛选设计新引物,优化反应条件,测定方法灵敏度和特异性。8h短时增荫后,对24份模拟粪便样品进行检测。
结果:已报道的多重PCR体系不适用于粪便中三种目的菌的检测:新建立的体系适用于粪便样品的检测,能在12 h内同时检测3种目的菌。通过短时增菌,该体系对粪便样品中沙门菌、志贺菌和大肠杆菌O157:H7的灵敏度分别为:8.5CFU/10ml增菌液,27CFU/10ml增菌液,5 CFU/10ml增菌液。对28株目的菌和13株非目的菌的检测结果表明该方法具有良好特异性。
结论:成功建立能在12h内同时检测粪便样品中沙门菌、志贺菌和大肠杆菌O157:H7的多重PCR检测方法,该方法特别适用于健康带菌者3种目的菌的快速筛查,为卫生检验检疫、食品微生物安全的监测和监督提供一有用的工具。