目的：建立了高效液相色谱法同时测定茜草药材中茜草素、羟基茜草素和大叶茜草素含量的方法。 方法：采用Dikma Diamonsil TM C18(4.6mm×250 mm，5μm)色谱柱分离样品，流动相为：甲醇-乙腈-0.2％磷酸(1：2：1)，流速1.0 mL·min-1，柱温45℃，检测波长为250nm。 结果：茜草素、羟基茜草素和大叶茜草素与相邻色谱峰分离度均达到2.0以上，含量测定的线性关系良好，γ分别为0.9999(n=5)，0.9999(n＝5)，0.9999(n=5)，三者的线性范围分别为0.0232 μg～0.116μg，0.152 μg～0.760μg，0.210μg-1.05μg；回收率分别为：95.5％(n=5)，95.7％(n=5)，99.3％(n=3)；方法精密度良好，茜草素、羟基茜草素和大叶茜草素三者峰面积的RSD值分别为0.49％(n=5)，0.50％(n=5)，0.58％(n=5)；该方法重复性良好，RSD值分别为：1.1％(n=5)，0.66％(n=5)，0.78％(n=5)。 结论：本方法简便、快捷、准确可靠，可以用于茜草原药材的质量控制。