通过ribosome profiling和代谢标记的方法研究神经细胞亚细胞结构的蛋白合成

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许多生命过程与蛋白质的合成有密切关系,例如已报导的长时程记忆的形成就十分依赖蛋白质合成,而研究某些特定亚细胞定位的蛋白质组可以反映蛋白质的功能以及生命过程的机制。为了研究此类问题,我们拟用APEX结合ribosome profiling或BONCAT代谢标记的方法来实现对神经细胞特定位点新合成的蛋白质组的研究。APEX技术可以实现活细胞内特定亚细胞结构的蛋白标记,使其周围蛋白带上生物素标记,再结合ribosomes profiling的方法,使亚细胞定位的核糖体被标记,富集这些核糖体就能的得到mRNA信息。而BONCAT可以使一段时间内新合成的蛋白被标记和富集,在时间尺度上更有优势。在不易分离且结构特殊的神经细胞中,我们尝试用这两种方法来研究突触等结构中的蛋白表达。
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