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脑缺血、脑外伤等脑损伤后,脑内继发炎症反应,加重脑损伤.花生四烯酸的5-脂氧酶产物半胱氨酰白三烯(LTC4,LTD4,LTE4),通过其受体(CysLT1和CysLT2受体)对炎症反应发挥重要调节作用.我们已经报道CysLT1受体拮抗剂对脑缺血、脑外伤的保护作用,并研究了其表达分布、与细胞损伤的关系.近年来,对CysLT2受体与脑损伤的调节作用做了研究,得到一些新的发现.(1)局灶性脑缺血后CysLT2受体脑内表达、分布特点利用本实验室制备的CysLT2受体多克隆抗体,我们观察大鼠局灶性脑缺血后该受体表达分布的时间和空间特点.在缺血中心区,CysLT2受体表达呈双峰特点,即12(6 ~24)h和14(7~28)d分别有两个表达高峰;急性期(24 h)主要分布在受损的神经元;后期(14 d)集中在增多、增大的小胶质细胞.在缺血周边区,24 h后CysLT2受体表达逐渐增高,主要分布在后期(14 d)增殖的星形胶质细胞,但在该区小胶质细胞的分布较少.这些结果提示,CysLT2受体主要介导急性期神经元缺血损伤、后期小胶质细胞和星形胶质细胞激活的调节.(2) CyaLT2受体介导缺血性损伤后的小胶质细胞激活缺氧缺糖(OGD)和LTD4(0.1~ 1000 nmol·L-1)可激活大鼠原代培养的小胶质细胞,表现为细胞体积增大、形态改变、数量增加、吞噬功能增强.应用CysLT2受体shRNA慢病毒载体抑制其表达,可减轻OGD和LTD4诱导的小胶质细胞激活程度;并减轻混合培养中的小胶质细胞激活以及神经元OGD损伤程度.此外,CysLT2受体shRNA不仅抑制小胶质细胞CysLT2受体表达,还增加CysLT1受体表达,提示两种受体亚型间存在协同作用.(3) CysLT2受体介导星形胶质细胞导缺血性损伤及AQP4表达增高OGD 4 h诱导较严重缺血损伤后,大鼠原代星形胶质细胞水通道蛋白AQP4以及CysLT2受体表达增高,CysLT2受拮抗剂Bay cysLT2可抑制OGD诱导的细胞损伤和AQP4表达增高.AQP4 siRNA抑制AQP4表达,可减轻星形胶质细胞OGD损伤.这些结果提示CysLT2受体介导星形胶质细胞缺血损伤后AQP4增高,而增高的AQP4介导细胞损伤.(4)CysLT2受体信号转导特点在稳定转染hCysLT2受体的HEK293细胞,通过基因干预、抑制剂/拮抗剂等方法,发现LTC4或LTD4激活CysLT2受体后,诱导ERK1/2磷酸化,继而激活即早蛋白Egr-1,最后诱导炎症因子IL-8表达和释放增加.因此,表明CysLT2受体激活后,细胞内信号转导通过ERK1/2→Egr-1→IL-8途径.(5)CysLT2受体拮抗剂筛选在高表达CysLT2受体的C6细胞,以LTD4(1 mol·L-1)诱导细胞内钙增高为指标,对系列合成化合物进行CysLT2受体拮抗活性的筛选,发现化合物DXW-1,2,13,23,29,30能抑制LTD4诱导的细胞内钙升高,为今后深入研究提供了线索.由于长期缺乏商品化CysLT2受体选择性拮抗剂以及针对动物的特异性抗体(最近才开始问世),CysLT2受体研究一直滞后.我们的研究表明,CysLT2受体在脑缺血后神经元损伤、小胶质细胞激活、星形胶质细胞反应起主要调节作用,并初步阐述了其信号转导特点,该受体亚型可能是新的脑缺血治疗靶点,值得关注和深入研究.