【摘 要】
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2012年,我们在中国养殖场的一批患早期死亡综合征/急性肝胰腺坏死症的中国明对虾中发现了一株黄头病毒(YHV)新株型,拟命名为YHV-8.本文建立了一种实时荧光一步RT-LAMP方法,此方法可以很好的用于检测YHV-1和YHV-8.本研究基于黄头病毒基因组的一段保守序列设计了6条特异性引物.优化后的LAMP体系中,包含8mM的Mg2+和1.SmM的dNTPs,在58℃反应60分钟.这个RT-LAM
【机 构】
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农业部海洋渔业可持续发展重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所 青岛266071;上海海洋大学 上海201306
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2012年,我们在中国养殖场的一批患早期死亡综合征/急性肝胰腺坏死症的中国明对虾中发现了一株黄头病毒(YHV)新株型,拟命名为YHV-8.本文建立了一种实时荧光一步RT-LAMP方法,此方法可以很好的用于检测YHV-1和YHV-8.本研究基于黄头病毒基因组的一段保守序列设计了6条特异性引物.优化后的LAMP体系中,包含8mM的Mg2+和1.SmM的dNTPs,在58℃反应60分钟.这个RT-LAMP方法的检测灵敏度能够达到7拷贝/反应.为检测本方法的特异性,我们用其测试了患TSV, WSSV, IHHNV, HPV和SPF对虾组织的总RNA,显示无非特异性反应存在.标准曲线表现出很高的相关系数,表明本方法适合于进行定量研究.本实验还运用新建立的RT-LAMP方法,对几批养殖对虾样品进行了检测.结果 表明,111份凡纳滨对虾样品中,有3份阳性.8份中国明对虾样品中,有6份阳性.19份罗氏沼虾样品中,有5份阳性.9份日本对虾样品均未阴性.本研究表明,新建立的rRT-LAMP方法适合于快速灵敏的检测黄头病毒.
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