一种提取茶树基因组DNA的方法--改良的CTAB法

来源 :第二届中华农圣文化国际研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ibm__1235
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由于茶树叶片中富含茶多酚和生物碱等次生物质,DNA的提取相对比较困难,未加预处理液的样品在提取过程中褐变现象明显,而且得到的沉淀为凝胶状,经纯化得到很少或者得不到DNA;而在提取前加入提取预处理液的样品,整个提取过程中提取液均保持原来的绿色,无褐变现象发生,并且得到的DNA经电泳检测显示条带整齐,无RNA或者多糖等杂质污染,无论从纯度还是浓度均符合试验要求。改良的CTAB法提取DNA具有步骤简单,耗时间少的特点,所用试剂也均为普通试剂。SDS异丙醇法步骤繁琐,且用到试剂较多。普通的CTAB法虽然步骤简单,但其主要用于草本植物和不含酚类或含酚类较少的植物的DNA的提取,并不适合富含多酚类物质的茶叶基囚组DNA的提取,而且不能有效去除蛋自质和多糖等其他杂质,对此,本研究采用酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)的试剂加以纯化,未纯化前呈现乳白色的沉淀物,沉淀呈透明状的黏稠物,得到了纯度高的DNA沉淀物。
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