硫酸依替米星的分离纯化工艺研究

来源 :上海市药学会抗生素专业委员会首届青年学术论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yx5813399
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
  目的:研究大孔吸附树脂结合盐析结晶法分离纯化依替米星水解液冻干颗粒粗品,提高硫酸依替米星成品质量,得到高纯度药用级硫酸依替米星。方法:用HPLC检测方法,以依替米星的吸附量及与主要杂质庆大霉素C1a的分离度为指标,考察大孔树脂分离纯化依替米星的吸附性能和沈脱参数。结果:依替米星相品水溶液上柱的最佳pH为10.5,分离纯化依替米星的有效吸附剂为大孔吸附树脂HZ-806,其静态吸附量大于40mg/mL;最佳结晶盐析剂为甲醇,与浓缩液最佳比例为4∶1.此工艺路线获得的成品纯度大于96.5%,总收率达55%。结论:该高纯度药用级硫酸依替米星的规模化分离纯化方法为国内首次报道,工艺简单可靠,分离效果好,适于工业化生产。
其他文献
了解上海地区规模化猪场分离的大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的分离率、耐药性和基因型。收集2010年9月~2011年3月从上海地区10个规模化养猪场分离的296株大肠埃希菌,采用微量肉汤稀释法进行药敏试验,采用PCR技术分别检测TEM、CTX-M、OXA和SHV基因。在296株大肠埃希菌中,有52株大肠埃希菌产ESBLs,产酶率为17.6%。在52株ESBLs菌株中,有46株为TEM型
建立了检测猪肉中5种α2受体激动剂的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC/MS/MS)分析方法。样品加入碱性缓冲液,在再经过乙酸乙酯提取,浓缩、净化后用乙腈-0.2%甲酸溶解,经超高效液相色谱-串联质谱在多反应检测(MRM)模式下测定。结果显示盐酸可乐定等5种Alpha受体激动剂标准曲线在0.5~100μg/L浓度范围内线性良好。线性相关系数(r)均大于0.99;在1~50μg/kg添加水平下,5种
以氢化大豆卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰甘油和胆固醇作为脂质膜材,采用薄膜水化法、高压均质法结合挤出法制备注射用两性霉素B脂质体。以平均粒径和有关物质作为筛选指标优化了制备工艺。按照优化工艺制备的注射用两性霉素B脂质体的平均粒径为88±9 nm,杂质总量和最大单个杂质分别为5.4%和1.2%,包封率为97.9%。
将来自腐生子囊菌中的菌丝霉素成熟肽基因经大肠杆菌密码子优化后,克隆到pET32a(+)载体中,构建了含His-tag标鉴和TEV酶识别位点的菌丝霉素表达质粒pYG330,使含菌丝霉素的融合蛋白在大肠杆菌中以可溶形式高效表达。建立了菌丝霉素的纯化路线,将融合蛋白进行TEV酶切后脱盐再进行亲和层析,收集目的蛋白冻干浓缩,通过反相高效液相层析(RP-HPLC)进一步纯化获得纯度为72%目的多肽。纯化所得
本实验室将含假单胞菌头孢菌素C(CPC)酰基转移酶基因ecs的pYG233质粒转入产黄顶头孢霉(Cephalosporium acremonium)中构建可生产7-ACA(7-氨基头孢烷酸)的基因工程菌株,该菌株含有phleo(腐草霉素)抗性标记。本实验以本实验室构建的该基因工程菌株作为第一亲本,并构建含有质粒pYG236的hygB(潮霉素)抗性标记菌株作为第二亲本进行基因组改组,以含有双重标记抗
敲除雷莫拉宁生物合成基因簇中orf29,所得的突变株能够发酵产生无糖雷莫拉宁,但其功能还未确定。本研究为了验证orf9的体内功能,在大肠杆菌中构建orf29回补质粒pSET152/PermE*/ramo-orf29,将其转入敲除了orf29的雷莫拉宁产生菌突变株SIPI-A.2006Δorf29中,通过同源重组单交换的方法构建orf29回补突变株。经发酵验证,突变株发酵产物中检测到有雷莫拉宁产生,
目的:克隆并异源表达万古霉素糖基转移酶基因gtfE,建立其转糖反应的体外测活方法。方法:从万古霉素总DNA中克隆糖基转移酶基因gtfE,并连入pET37b构建表达载体和菌株,将表达的重组蛋白以亲和色谱分离纯化,用LC-MS检测其活性。结果:成功建立了万古霉素糖基转移酶基因gtfE体外转糖反应模型,该模型可以体外转化尿苷二磷酸葡萄糖,LC-MS确定为葡萄糖万古霉素;但不能转化鸟苷二磷酸D型廿露糖。结
雷莫拉宁是由游动放线菌产生的具有新型结构的脂肽类抗生素,其对于抗万古霉素肠球菌感染的治疗现在处于Ⅲ期临床阶段。雷莫拉宁的肽链骨架是由非核糖体合成酶(NRPS)负责合成。据文献推测,一个单独的NRPS蛋白Ramo-orf17可能负责线性NRPS蛋白Ramo-orf13中第6个模块对苏氨酸的活化和上载,但是并没有任何的实验证据证明。本文利用同源重组双交换和位点特异性插入等方法,系统地进行了体内的基因敲
本文构建了同框敲除质粒plw-dNogD,利用接合转移的方法将其转入黑胡桃链霉菌Streptomycesnogalater ATCC27451.通过同源重组双交换的方法敲除了糖基转移酶基因NogD内部223个氨基酸,松弛培养后筛选得到了双交换阻断突变株SIPI-A.mdnogd (△nogD),经过测序验证,该突变株与野生型相比,糖基转移酶NogD确实缺失了223个氨基酸从而引起失活。对该突变株进
7-氨基头孢烷酸(7-ACA)是生产许多半合成头孢菌素类抗生素的中间体,目前工业生产主要采用两步酶法转化头孢菌素C(CPC)为7-ACA。本研究在前期工作获得的一个可以直接转化头孢菌素C为7-ACA的头孢菌素C酰化酶的基础上,采用易错PCR,引入不同浓度的Mg2+和Mn2+,得到的易错PCR产物经克隆、转化后进行初筛,共筛选了400株转化子,有35株活性比未突变的酶活性提高,将35株初筛活性提高的