外泌体在骨髓间充质干细胞治疗椎间盘退变性疾病中的价值研究

来源 :中华医学会第十八届骨科学术会议暨第十一届COA国际学术大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xujungang
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  目的:初步探讨髓核细胞及骨髓间充质干细胞分泌的外泌体在两种细胞相互作用中发挥的作用.方法:1.利用临床手术标本分离培养人髓核细胞及人骨髓间充质干细胞行体外培养;2.多步离心法提纯髓核细胞及骨髓间充质干细胞分泌的外泌体;3.利用透射电镜及western-blot对提取的外泌体进行形态大小及标志蛋白的检测,同时利用PKH67荧光标记外泌体后与细胞共孵育,检测细胞对外泌体的摄取能力;4.transwell 细胞迁移实验检测髓核细胞外泌体对骨髓间充质干细胞诱导迁移的作用;5.CCK-8检测骨髓间充质干细胞促进退变髓核细胞的增殖能力;6.qRT-PCR检测经髓核细胞外泌体诱导后的骨髓间充质干细胞中Aggrecan、Sox-9、Collagen Ⅱ、Ca12、Krt19及Hif-1a基因mRNA的表达变化,同时检测经骨髓间充质干细胞外泌体诱导后的髓核细胞中的Aggrecan、Sox-9、CollagenⅡ、MMP-2/-3及TIMP-1的mRNA表达.
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