【摘 要】
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目的 确定假定蛋白CPSIT_ 0594在鹦鹉热嗜衣原体(Chlamydophila psittaci,Cps)感染细胞中的定位及特征.方法 采用PCR方法扩增鹦鹉热嗜衣原体CPSIT_0594基因,克隆入pGEX-6p-1原核表达载体,转化至大肠杆菌E.coli BL21,IPTG诱导表达融合蛋白GST-CPSIT_ 0594,纯化后免疫小鼠制备抗体,间接免疫荧光(IFA)用来检测CPSIT_0
【机 构】
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南华大学附属第二医院 南华大学病原生物研究所
【出 处】
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中华医学会第十二次全国临床微生物学术年会
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目的 确定假定蛋白CPSIT_ 0594在鹦鹉热嗜衣原体(Chlamydophila psittaci,Cps)感染细胞中的定位及特征.方法 采用PCR方法扩增鹦鹉热嗜衣原体CPSIT_0594基因,克隆入pGEX-6p-1原核表达载体,转化至大肠杆菌E.coli BL21,IPTG诱导表达融合蛋白GST-CPSIT_ 0594,纯化后免疫小鼠制备抗体,间接免疫荧光(IFA)用来检测CPSIT_0594蛋白在细胞内的定位,RT-PCR和Western blot监测其转录和表达时相,并采用ELISA检测其在体外诱导THP-1细胞表达炎症因子的情况.结果 CPSIT_0594蛋白定位于Cps包涵体,为Cps包涵体蛋白;该蛋白在衣原体感染12h后开始表达,持续到整个感染周期;CPSIT_0594体外能诱导THP-1细胞产生炎症因子.结论 CPSIT_0594作为包涵体蛋白,为阐明衣原体致病机制提供了重要的实验依据.
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