【摘 要】
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目的：构建携带人少突胶质细胞系基因-髓鞘碱性蛋白(Golli-MBP)与红色荧光蛋白(RFP)共表达的慢病毒载体并转染人白血病T细胞(jurkat),摸索最佳感染复数(MOI),并筛选出稳定转染细胞株.为研究Golli-MBP在自生免疫性疾病机制中的作用奠定基础.材料与方法：通过在线软件设计并合成Golli-MBP基因的shRNA序列,合成、退火形成双链DNA,再通过T4 DNA连接酶连接入pFU
【机 构】
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南京医科大学口腔疾病研究江苏省重点实验室,南京医科大学附属口腔医院牙体牙髓黏膜科,210029,南京
【出 处】
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2014全国口腔生物医学学术年会暨“西湖国际”口腔医学高峰论坛
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目的：构建携带人少突胶质细胞系基因-髓鞘碱性蛋白(Golli-MBP)与红色荧光蛋白(RFP)共表达的慢病毒载体并转染人白血病T细胞(jurkat),摸索最佳感染复数(MOI),并筛选出稳定转染细胞株.为研究Golli-MBP在自生免疫性疾病机制中的作用奠定基础.材料与方法：通过在线软件设计并合成Golli-MBP基因的shRNA序列,合成、退火形成双链DNA,再通过T4 DNA连接酶连接入pFU-GW慢病毒载体上；转入制备好的大肠杆菌感受态细胞,PCR鉴定阳性重组子,测序验证.将重组慢病毒载体pFU-GW-Golli-MBP共转染293T细胞,包装慢病毒并测定滴度.pFU-GW-Golli-MBP转染jurkat,在荧光倒置显微镜下观察jurkat荧光表达情况,摸索最佳MOI值,并用嘌磷霉素筛选出稳定表达的jurkat细胞株.结果：pFU-GW-Golli-MBP测序分析证实与genbank报道的Golli-MBP基因序列相同.包装后慢病毒测定滴度为2×108TU/ml.pFU-GW-Golli-MBP转染jurkat细胞,72h后荧光显微镜下可见大量红色荧光(最佳MOI=50),嘌磷霉素药物筛选稳定细胞株的最佳浓度为4ug/ml.结论：成功构建了人Golli-MBP与RFP共表达慢病毒载体转染jurkat细胞,摸索出最佳MOI值,并筛选出稳定转染细胞株.
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