【摘 要】
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[目的]建立血浆(血清)TaqMan锁核酸(LNA)探针HBV DNA荧光定量PCR检测方法,探讨其临床应用价值。[方法]用PUCm-T载体和PCR纯化产物连接,转染DH5a菌,筛选阳性菌落,提取质粒,制
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[目的]建立血浆(血清)TaqMan锁核酸(LNA)探针HBV DNA荧光定量PCR检测方法,探讨其临床应用价值。[方法]用PUCm-T载体和PCR纯化产物连接,转染DH5a菌,筛选阳性菌落,提取质粒,制备外标准品;在HBV基因组X区设计一对引物和TaqMan LNA探针,严格优化反应物的组成和扩增条件,并对该方法进行评价。[结果]建立的TaqMan LNA探针HBV DNA荧光定量PCR方法最低检出率为400IU/mL;批内误差为1.8%～6.5%,批间误差为2.6%～9.1%;在4.0×10~2～4.0×10~8IU/mL之间与Ct值具有很好的线性(Ct=-1.3911 Ln(x)+41.65,r=-0.9958);与商品化试剂盒比对,相关系数为0.974(p<0.05)。两种试剂均具有较好的可比性。与普通TaqMan荧光定量PCR比较,有更高的稳定性,灵敏度。在乙型肝炎临床治疗监测发现,外周血中HBV DNA含量检测可有效反映治疗效果,指导临床用药。[结论]荧光定量PCR检测方法是一种相对准确、灵敏度高、特异性较强和较简便的HBV DNA定量检测技术,在临床乙型肝炎基因诊断,特别指导临床用药和治疗监测方而具有重要意义。
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