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目的 构建人B淋巴细胞特异性启动子Eμ-VH调控c-Myc表达的慢病毒载体pEMIR.方法 首先以pLV-c-Myc-IRES-EGFP为模板,PCR扩增目的基因c-Myc,In-Fusion克隆至EcoR V/Sal I酶切的pEμ-VH-miR155中,获得pEVC；接着以pEVC为模板,PCR扩增Eμ-VH-c-Myc,In-Fusion克隆至HpaI酶切的pHW-H2BmRFP中,获得pEVCHR；最后以pEVCHR为模板,PCR扩增Eμ-VH-c-Myc-H2BmRFP,In-Fusion克隆至Nhe I/CIaI酶切的pCDH-EF1 α-MCS-GFP-Puro中,得到慢病毒载体pEMIR.所构建的质粒均经测序和酶切鉴定.将pEMIR分别瞬时转染入293T、OCL-LY3和OCL-LY10细胞,倒置荧光显微镜检测EGFP和mRFP表达,收集细胞并提取总RNA和总蛋白以检测c-Myc表达,以对pEMIR进行体外功能验证.结果 测序和酶切证实成功构建了pEMIR.pEMIR转染三种细胞后,倒置荧光显微镜下可见绿色和红色荧光,同时转基因c-Myc表达正常.结论 成功构建Eμ-VH调控c-Myc表达的慢病毒载体,为相关后续研究打下了良好基础.