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目的：HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)是HBV基因组复制中间体mRNA和前基因组RNA的合成模板,可作为外周血单个核细胞(PBMCs)是台存在HBV复制的重要指标。通过对乙型肝炎病毒(HBV)复制患者PBMCs中HBV DNA和cccDNA的定量检测,证实HBV能感染PBMCs,探讨血清中HBV DNA和PBMCs中HBV DNA、cccDNA之间的关系,并观察HBVDNA和cccDNA在慢性乙型肝炎患者PBMCs中的分布情况。
方法：收集2005年10月至2006年3月中南大学湘雅医院感染病科门诊和住院的慢性乙型肝炎患者外周血标本58例。所有病例血清HBVDNA均阳性,诊断符合2000年9月第十次全国病毒性肝炎诊断标准。以Ficoll密度梯度离心法获取PBMCs,采用荧光PCR法定量检测PBMCs标本中总HBV DNA和cccDNA。数据利用 SPSS11.5软件进行统计学处理,PBMCs中总HBV DNA与cccDNA比值分析经对数化后采用直线回归分析。
结果：58份PBMCs标本中,65.5％(38158)PBMCs HBV DNA阳性,53.5％(31/58)PBMCs cccDNA阳性。但末次PBMCs洗涤液均未扩增出HBV DNA和cccDNA。PBMCs中HBV DNA和cccDNA之间(r=0.894,P＜0.001)、血清中HBV DNA和PBMCs中HBV DNA之间(r=0.666,P＜0.001)、血清中HBV DNA和PBMCs中cccDNA之间(r=0.520,P＜0.001)均存在正相关关系,同一患者PBMCs中总HBV DNA含量是cccDNA含量的16-4倍至2310.3倍。
结论：HBV复制患者PBMCs中cccDNA检测结果阳性,进一步证实HBV能感染PBMCs,并在其中复制;cccDNA水平与PBMCs内总HBV DNA水平正相关,提示细胞内HBV复制中间体cccDNA含量的增加,必将产生大量的病毒,加重血清HBVDNA载量;PBMCs中未发现总HBVDNA/cccDNA的比值=1的情况,即未找到cccDNA相对稳定状态的证据,这也许与PBMCs作为免疫细胞的集合体,参与了机体对HBV免疫作用过程的各个环节和免疫细胞更新较快有关。