【摘 要】
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目的 探寻恢复雌激素受体(ER)α阴性乳腺癌患者ERα功能的方法并深入研究其分子机制对ERα阴性乳腺癌的内分泌治疗具有重要临床意义.方法 检测三氧化二砷(As2O3,As)诱导三阴乳腺癌细胞再表达ERα的水平：RT-PCR,qRT-PCR及Western blot；检测As恢复ERα的功能：RT-PCR及qRTPCR检测ERα靶基因pS2和GREB1的mRNA水平；检测microRNA(miRNA
【机 构】
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南京医科大学公共卫生学院,江苏南京210029
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目的 探寻恢复雌激素受体(ER)α阴性乳腺癌患者ERα功能的方法并深入研究其分子机制对ERα阴性乳腺癌的内分泌治疗具有重要临床意义.方法 检测三氧化二砷(As2O3,As)诱导三阴乳腺癌细胞再表达ERα的水平：RT-PCR,qRT-PCR及Western blot；检测As恢复ERα的功能：RT-PCR及qRTPCR检测ERα靶基因pS2和GREB1的mRNA水平；检测microRNA(miRNA)表达水平：RT-PCR和qRT-PCR；检测miRNA在As恢复ERα中的作用：miRNA-mimics和anti-miRNA转染、RT-PCR、qRTPCR和Western blot；检测p53在As所致miRNA表达改变及恢复ERα中的作用：野生型p53(wtp53)和突变型p53(mtp53)转染、qRT-PCR和Western blot；体内观察As处理对肿瘤组织p53,miR-18a和ERα的表达及功能的影响：裸鼠皮下荷瘤实验、RT-PCR、qRT-PCR及Western blot.结果 As处理MDA-MB231细胞可剂量依赖性升高ERα的mRNA和蛋白表达水平,升高pS2和GREB1的mRNA水平,同时升高wtp53的表达和磷酸化水平而下调miR-18a；靶基因预测软件(TargetScan)分析ERα是miR-18a的下游靶基因；在MDA-MB-231细胞中转染anti-miR-18a可上调ERα的mRNA和蛋白表达水平,而在MCF-7细胞或As处理的MDA-MB-231细胞中转染miR-18a-mimics均可下调ERα的mRNA和蛋白表达水平及功能；在MDA-MB-231细胞中转染wtp53可下调miR-18a表达水平,进而上调ERα的表达水平和细胞增殖；转染wtp53可进一步增加As所致MDA-MB-231细胞miR-18a表达下降和ERα表达上升,相反,转染mtp53可阻滞As所致MDA-MB-231细胞miR-18a表达下降和ERα表达上升；将MDA-MB-231细胞接种至裸鼠皮下成瘤后再用As处理,结果发现与对照组肿瘤组织相比,As处理可上调wtp53的mRNA和蛋白表达水平,下调miR-18a表达,进而诱导ERα的表达和活性上升.结论 wtp53下调miR-18a的表达水平在As诱导ERα阴性MDA-MB-231细胞恢复ERα的表达及功能过程中发挥重要作用.
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