【摘 要】
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本试验设计合成了1对引物,序列分别为:上游引物5′CCgACTTTTAAATCCgT 3′;下游引物5′gAACAgTTgTTCgCTAA3′,将胸膜肺炎放线杆菌生物Ⅰ型血清2,4,6,9,10型标准菌株在合适的培
【机 构】
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华中农业大学畜牧兽医学院病毒室; 中国农业科学院兰州兽医研究所;
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本试验设计合成了1对引物,序列分别为:上游引物5′CCgACTTTTAAATCCgT 3′;下游引物5′gAACAgTTgTTCgCTAA3′,将胸膜肺炎放线杆菌生物Ⅰ型血清2,4,6,9,10型标准菌株在合适的培养基上增殖后,经过处理,制备了用于本试验的模板,经过条件的摸索,建立了检测猪胸膜肺炎放线杆菌的PCR方法。本方法采用50μL PCR反应体系,其中有5μL 10倍缓冲体系、3μL 25mM MgC12、1μL 2mM dNTP、5μM的上游引物和下游引物各3μL、Taq0.5μL、模板7μL、无菌水27.5μL,反应条件为:94℃变性3分钟,94℃1分钟,50℃1分钟30秒,72℃1分40秒,进行30个循环后72℃延伸10分钟,用琼脂糖电泳检测PCR产物。猪胸膜肺炎放线杆菌Ⅰ型菌血清2,5,6,9,10型均能扩增出预期的610bp片段;大肠杆菌、猪痢疾蛇形螺旋体、多杀性巴氏杆菌、支气管败血性波氏杆菌的扩增结果为阴性,表明该方法是特异性的。用该方法检测了从具有呼吸道症状猪的肺脏中分离的30个菌株,其中有11株为阳性,19株为阴性。本研究结果为快速鉴定猪胸膜肺炎放线杆菌提供了有用的方法。
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