【摘 要】
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目的 建立一种能对MHV1、MHV3、JHM、A59四种毒株进行分型检测的新方法.方法 根据MHV四种毒株序列比对结果设计两对PCR通用引物和四个单碱基延伸引物,提取MHV四种毒株RNA,逆转录后进行PCR扩增,纯化扩增产物,用SNaPshot方法进行单碱基延伸,将产物进行毛细管凝胶电泳分析MHV基因型.用SNaPshot方法检测41例小鼠血清样本,将阳性样本进行克隆测序检测.结果 当T1～ T4
【出 处】
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2014第十一届中国实验动物科学年会
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目的 建立一种能对MHV1、MHV3、JHM、A59四种毒株进行分型检测的新方法.方法 根据MHV四种毒株序列比对结果设计两对PCR通用引物和四个单碱基延伸引物,提取MHV四种毒株RNA,逆转录后进行PCR扩增,纯化扩增产物,用SNaPshot方法进行单碱基延伸,将产物进行毛细管凝胶电泳分析MHV基因型.用SNaPshot方法检测41例小鼠血清样本,将阳性样本进行克隆测序检测.结果 当T1～ T4引物修饰的poly T的数量分别为0、3、10和15,其浓度比为1(2μmol/L)∶1(3μmol/L)∶1(2.5 μmol/L)∶1(5μmol/L),引物大小分别为16bp、19bp 、26bp和31bp时,SNaPhot最低检测浓度为1.25 ng/μL(MHV cDNA),特异性和准确性为100％,阳性样本均为JHM毒株.结论 建立的SNaPshot检测方法能对MHV1、MHV3、JHM、A59进行分型检测,并且具有灵敏、特异、准确的优点.
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